pCMV-N-Flag
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产品编号 D2722-1μg
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¥ 888.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-N-Flag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-Flag质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Flag tag 679-702
multiple cloning site 705-778
T7 promoter and T7 primer binding site 821-842
SV40 polyA signal 854-1237
f1 origin of ss-DNA replication 1375-1681
bla promoter 1706-1830
SV40 promoter 1850-2188
neomycin/kanamycin resistance ORF 2223-3014
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal 3015-3473
pUC origin 3602-4269

pCMV-N-Flag质粒的图谱如下:

pCMV-N-Flag质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2722 pCMV-N-Flag.pdf

pCMV-N-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag)包括:

Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I

pCMV-N-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 855
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 1009
Nhe I G`CTAG,C 598 Mun I C`AATT,G 1102
Sac I G,AGCT`C 656 Hpa I GTT|AAC 1115
Sac II CC,GC`GG 663 Mlu I A`CGCG,T 1238
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Dra III CAC,NNN`GTG 1468
Not I GC`GGCC,GC 669 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2127
PspA I C`CCGG,G 706 BseR I GAGGAG 16/14 2170
Xma I C`CCGG,G 706 Stu I AGG|CCT 2173
Srf I GCCC|GGGC 708 Cla I AT`CG,AT 2192
Sma I CCC|GGG 708 Kas I G`GCGC,C 2351
BamH I G`GATC,C 713 Nar I GG`CG,CC 2352
Hind III A`AGCT,T 719 Ehe I GGC|GCC 2353
Pst I C,TGCA`G 729 Bbe I G,GCGC`C 2355
EcoR I G`AATT,C 731 Msc I TGG|CCA 2434
EcoR V GAT|ATC 739 Tth111 I GACN`N,NGTC 2470
Sal I G`TCGA,C 743 BsrD I GCAATG, 8 2585
Acc I GT`MK,AC 744 Bsp1286 I G,DGCH`C 2655
Bgl II A`GATC,T 749 Rsr II CG`GWC,CG 2868
PaeR7 I C`TCGA,G 755 BsiC I TT`CG,AA 3034
Xho I C`TCGA,G 755 BstB I TT`CG,AA 3034
Xba I T`CTAG,A 761 Bsa I GGTCTC 7/11 3341
Spe I A`CTAG,T 767 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3681
Bsp120 I G`GGCC,C 773 ApaL I G`TGCA,C 3956
Apa I G,GGCC`C 777

pCMV-N-Flag质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(821-842): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-Flag的全序列信息:D2722 pCMV-N-Flag-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2722-1μg pCMV-N-Flag 1μg
D2722-001μg pCMV-N-Flag 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pCMV-N-Flag质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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使用本产品的文献:
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