pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白)
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产品编号 D2705-1μg
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¥ 888.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-N-DsRed是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein,香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个DsRed的完整编码序列,并且在DsRed前面加入Kozak序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-DsRed质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Kozak sepuence 671-676
DsRed 677-1351
Multiple cloning site 1352-1417
T7 promoter and T7 primer binding site 1460-1482
SV40 polyA signal 1495-1877
f1 origin of ss-DNA replication 2015-2319
bla promoter 2344-2463
SV40 promoter 2488-2826
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2861-3653
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3654-4111
pUC origin 4238-4904

pCMV-N-DsRed质粒(4959bp)的图谱如下:

pCMV-N-DsRed质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2705 pCMV-N-DsRed.pdf

pCMV-N-DsRed中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括:

AclI AflII AscI AsiSI BaeI BbvCI BcgI BlpI
BmgBI Bpu10I BsiWI BsmBI BspEI BspQI BssHII BstXI
BstZ17I EarI EcoNI Esp3I FseI NotI NruI PmeI
PmlI PpuMI PshAI PspXI SacII SapI ScaI SgrAI
SmaI SrfI SwaI TspMI XcmI XmaI XmnI

pCMV-N-DsRed中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once)包括:

AccI GT’MK,AC 1383 KasI G’GCGC,C 2988
AgeI A’CCGG,T 664 MfeI C’AATT,G 1741
AhdI GACNN,N’NNGTC 856 MluI A’CGCG,T 1877
AleI CACNN|NNGTG 1304 MscI TGG|CCA 3071
ApaI G,GGCC’C 1416 NarI GG’CG,CC 2989
ApaLI G’TGCA,C 4593 NdeI CA’TA,TG 240
BamHI G’GATC,C 1352 NheI G’CTAG,C 597
BbsI GAAGACNN’NNNN, 1097 PaeR7I C’TCGA,G 1394
BclI T’GATC,A 1648 PciI A’CATGT 4907
BmtI G,CTAG’C 601 PflFI GACN’N,NGTC 3107
BsaI GGTCTCN’NNNN, 3978 PflMI CCAN,NNN’NTGG 1258
BspDI AT’CG,AT 2829 PluTI G,GCGC’C 2992
BsrDI GCAATG,NN’ 3222 PspOMI G’GGCC,C 1412
BsrGI T’GTAC,A 1215 PvuI CG,AT’CG 1494
BstBI TT’CG,AA 3671 RsrII CG’GWC,CG 3505
BstEII G’GTNAC,C 817 SacI G,AGCT’C 655
BtsI GCAGTG,NN’ 1830 SalI G’TCGA,C 1382
ClaI AT’CG,AT 2829 SbfI CC,TGCA’GG 1017
CspCI ,NN’(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN’ 382+417 SfiI GGCCN,NNN’NGGCC 2764
EagI C’GGCC,G 2895 SfoI GGC|GCC 2990
Eco53kI GAG|CTC 653 SnaBI TAC|GTA 346
EcoRI G’AATT,C 1370 SpeI A’CTAG,T 1406
EcoRV GAT|ATC 1378 Tth111I GACN’N,NGTC 3107
HindIII A’AGCT,T 1358 XbaI T’CTAG,A 1400
HpaI GTT|AAC 1754 XhoI C’TCGA,G 1394

pCMV-N-DsRed质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-DsRed primer (1298-1317): 5'- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3'
T7 primer (1461-1482): 5'- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3'
pCMV-N-DsRed的全序列信息请参考碧云天的网站上该质粒的信息。
pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。

图1. pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2705-1μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
D2705-100μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pCMV-N- DsRed质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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