p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用绿色荧光蛋白)
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产品编号 D2627-100μg
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¥ 1169.00
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1μg 100μg
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p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用绿色荧光蛋白)是碧云天自行研发的植物(如拟南芥等)原生质体表达质粒,可以作为原生质体瞬时转染的阳性对照质粒或通过构建EGFP融合蛋白而实现观察目的蛋白的亚细胞定位的目的。EGFP序列的N端有多个限制性酶切位点,根据阅读框在此插入目的基因就可以表达C端含有EGFP标签的融合蛋白,利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位;EGFP序列的C端有2X Flag标签(DYKDDDDKDYKDDDDK),可以在融合蛋白质粒转染原生质体后实现Western Blot检查融合蛋白表达水平的目的。质粒为氨苄青霉素抗性。

p35SPPDK promoter-EGFP-Flag载体中EGFP基因由35SPPDK强启动子驱动表达。35SPPDK强启动子由花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)启动子与玉米C4PPDK启动子融合而成,可以高效启动目的蛋白在植物细胞中的表达。

p35SPPDK-EGFP-Flag载体仅保植物留瞬时转染所需元件,为避免由于载体过大导致原生质体转染效率降低而采用精简的载体结构。此载体不可用于植物稳定遗传株系的构建。

p35SPPDK-EGFP-Flag采用来自农杆菌的胭脂碱合酶基因的终止子(nopaline synthase terminator,NOS-T),用于终止RNA聚合酶转录,对目的基因的表达进行调控。

p35SPPDK-EGFP-Flag质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
M13 forward primer(M13 fwd) 1-17
35SPPDK promoter 84-593
EGFP 617-1333
2X Flag-tag 1355-1402
NOS terminator 1411-1663
M13 reverse primer(M13 rev) 1702-1718
lac operator 1726-1742
lac promoter 1750-1780
CAP binding site 1795-1816
pUC origin 2104-2692
Ampicililin resistance ORF 2863-3723
Ampicililin promoter 3724-3828

p35SPPDK-EGFP-Flag质粒(4301bp)的图谱如下:

p35SPPDK-EGFP-Flag的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用绿色荧光蛋白).pdf

p35SPPDK-EGFP-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut p35SPPDK-EGFP-Flag包括:

AccI AfeI AgeI AscI AsiSI AvrII BbvCI
BclI BfuAI BglII BlpI BmtI BsiWI BspDI
BspMI BstBI BstEII BstXI BstZ17I Bsu36I ClaI
DraIII EagI EcoNI FseI HincII HpaI MfeI
MluI MscI NaeI NgoMIV NheI NotI NruI
PacI PflFI PflMI PmeI PmlI PpuMI PsiI
PspXI RsrII SacII SalI SbfI SexAI SfiI
SgrAI SmaI SnaBI SphI SrfI SwaI TspMI
Tth111I XcmI XmaI

p35SPPDK-EGFP-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut p35SPPDK-EGFP- Flag once)包括:

AatII G,ACGT`C 3858 EcoRV GAT|ATC 337
Acc65I G`GTAC,C 611 KasI G`GCGC,C 4158
AflII A`CRYG,T 1440 KpnI G,GTAC`C 616
AhdI GACNN,N`NNGTC 2936 NarI GG`CG,CC 4159
AlwNI CAG,NNN`CTG 2459 NcoI C`CATG,G 616
ApaI G,GGCC`C 396 NdeI CA`TA,TG 4108
ApoI R`AATT,Y 1687 NsiI A,TGCA`T 1531
AvaI C`YCGR,G 26 PaeR7I C`TCGA,G 26
BaeI ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 598 PluTI G,GCGC`C 4162
BamHI G`GATC,C 597 PshAI GACNN|NNGTC 245
BmgBI CAC|GTC 308 PspOMI G`GGCC,C 392
BsaAI YAC|GTR 556 PstI C,TGCA`G 1411
BsaBI GATNN|NNATC 1474 SacI G,AGCT`C 523
BsaI GGTCTCN`NNNN, 2997 SapI GCTCTTCN`NNN, 1927
BsmI G`AATG,CN` 437 ScaI AGT|ACT 3417
BsoBI C`YCGR,G 26 SfoI GGC|GCC 4160
BspEI T`CCGG,A 527 SpeI A`CTAG,T 1335
BspQI GCTCTTCN`NNN, 1927 SspI AAT|ATT 3740
BsrGI T`GTAC,A 1326 StuI AGG|CCT 1349
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4105 StyI C`CWWG,G 615
CspCI NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 300 XbaI T`CTAG,A 603
Eco53kI GAG|CTC 525 XhoI C`TCGA,G 27
EcoO109I RG`GNC,CY 3912 ZraI GAC|GTC 3856
EcoRI G`AATT,C 1688

p35SPPDK-EGFP-Flag质粒可使用的测序引物序列如下:

35SPPDK forward primer(473-494): 5'-CCTTTTCGCTGTACTCTCTCGC-3'

EGFP reverse primer(670-689): 5'-CGTTTACGTCGCCGTCCAG-3'

p35SPPDK-EGFP-Flag的全序列信息:D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2627-1µg p35SPPDK-EGFP-Flag 1μg
D2627-100µg p35SPPDK-EGFP-Flag 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1 µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100 µg包装的本产品质粒浓度为0.1 µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切。用于植物原生质体转化需进行质粒大量抽提。
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