pCMV-C-mOrange2 (橙色荧光蛋白)
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产品编号 D2625-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-C-mOrange2是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含mOrange2标签的融合蛋白。mOrange2蛋白是一种极其明亮的桔色荧光蛋白,与mOrange蛋白相比,其蛋白稳定性得以提高。

pCMV-C-mOrange2含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。pCMV-C-mOrange2在多克隆位点的后面有一个mOrange2的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有mOrange2标签的融合蛋白。利用mOrange2的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mOrange2抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mOrange2与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mOrange2,但可以尝试使用抗mcherry的抗体检测mOrange2。

pCMV-C-mOrange2为卡那霉素抗性,并且含有Neomycin筛选标记,转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-C-mOrange2质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Multiple cloning site 651-740
mOrange2 741-1448
T7 promoter and T7 primer binding site 1498-1519
SV40 polyA signal 1531-1914
f1 origin of ss-DNA replication 2052-2356
bla promoter 2381-2505
SV40 promoter 2525-2863
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2898-3689
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3690-4148
pUC origin 4277-4944

pCMV-C-mOrange2质粒(4996bp)的图谱如下:

pCMV-C-mOrange2质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2625 pCMV-C-mOrange2.pdf

pCMV-C-mOrange2中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-mOrange2)包括:

AclI AfeI AgeI AhdI AscI AsiSI BbsI
BcgI BlpI BmgBI Bpu10I BsiWI BsmBI BspEI
BsrGI BssHII BstZ17I EarI EcoNI Esp3I FseI
PmeI PmlI PpuMI PshAI PspXI SapI SbfI
SgrAI SpeI SwaI XcmI

pCMV-C-mOrange2中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-mOrange2 once)包括:

AccI GT`MK,AC 718 MluI A’CGCG,T 1914
AflII C’TTAA,G 1251 MscI TGG|CCA 3108
AleI CACNN|NNGTG 661 NarI GG’CG,CC 3026
ApaI G,GGCC’C 1453 NheI G’CTAG,C 597
ApaLI G’TGCA,C 4630 NotI GC’GGCC,GC 668
BaeI ,N)5’(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5 1185 PaeR7I C’TCGA,G 729
BamHI G’GATC,C 687 PciI A’CATGT 4944
BclI T’GATC,A 1685 PflFI CCAN,NNN’NTGG 3144
BglII A’GATC,T 723 PflMI G,GCGC’C 1146
BmtI G,CTAG’C 601 PluTI G,GCGC’C 3029
BsaI GGTCTCN’NNNN, 4015 PspOMI G’GGCC,C 1449
BsaXI ,NNN’(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN’ 2078 PstI C’TGCA,G 703
BseRI GAGGAG(N)8,NN’ 2844 PvuI CG,AT’CG 1531
BsgI GTGCAG(N)14,NN’ 1420 RsrII CG’GWC,CG 3524
BspDI AT’CG,AT 2866 SacI G,AGCT’C 655
BstBI TT’CG,AA 3708 SacII CC,GC’GG 662
BstEII G’GTNAC,C 893 SalI G’TCGA,C 717
BstXI CCAN,NNNN’NTGG 663 SfiI GGCCN,NNN’NGGCC 2801
BtsI GCAGTG,NN’ 1867 SfoI GGC|GCC 3027
ClaI AT’CG,AT 2866 SmaI CCC|GGG 682
CspCI ,NN’(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN’ 382 SnaBI TAC|GTA 346
DraIII CAC,NNN’GTG 2144 SrfI GCCC|GGGC 682
Eco53kI GAG|CTC 653 StuI AGG|CCT 2847
EcoRI G’AATT,C 705 TspMI C’CCGG,G 680
EcoRV GAT|ATC 713 Tth111I GACN’N,NGTC 3144
HindIII A’AGCT,T 693 XbaI T’CTAG,A 735
HpaI CC,TGCA`GG 1791 XhoI C’TCGA,G 729
KasI G’GCGC,C 3025 XmaI C’CCGG,G 680
MfeI C’AATT,G 1778 XmnI GAANN|NNTTC 871

pCMV-C-mOrange2质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

T3 primer (620-639): 5'-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3'

C-mOrange2 primer (852-873): 5'- AACCTTCGTATGGACGACCTTC -3'

pCMV-C-mOrange2的全序列信息:D2625序列信息.txt

pCMV-C-mOrange2质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。

图1. pCMV-C-mOrange2质粒转染HEK293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2625-1µg pCMV-C-mOrange2 (橙色荧光蛋白) 1μg
D2625-100µg pCMV-C-mOrange2 (橙色荧光蛋白) 100µg
说明书 1份
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-His-PreScission-SUMO质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,或者也可以同无缝克隆技术在SUMO标签之后插入目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株进行表达纯化。
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