FOPFlash(报告基因质粒)是TOPFlash(D2501)的阴性对照报告基因质粒。

FOPFlash质粒是以碧云天的pGL6-TA为模板，在其多克隆位点插入突变的TCF/LEF结合位点序列；它包括两组突变的TCF/LEF结合位点序列，每组中有三个重复序列，一组为正向序列，另一组是它的反向互补序列。

FOPFlash质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
TCF binding sites(mutant)	20-105
Minimal TA promoter (pTA)	140-162
luc2 reporter gene	194-1856
SV40 late poly(A) signal	1891-2112
SV40 early enhancer/promoter	2160-2578
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region	2603-3397
Synthetic poly(A) signal	3422-3470
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3537-3556
ColE1-derived plasmid replication origin	3794
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4585-5445
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5550-5703
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5652-5671

FOPFlash质粒的图谱如下：

FOPFlash质粒的TCF binding sites(mutant)序列详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2503 SuperTOPFlash(报告基因质粒).pdf

FOPFlash质粒中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut FOPFlash)包括：

Aat II	Afl II	Asc I	Ase I	Bsa I	BsaA I	BsiW I	BspM II
BssH II	Eco72 I	EcoR I	EcoR V	Nde I	Nhe I	Nru I	PaeR7 I
PflM I	Pme I	Pml I	Psp1406 I	PspA I	Rsr II	Sma I	SnaB I
Spl I	Srf I	Tth111 I	Vsp I	Xcm I	Xho I

FOPFlash质粒中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut FOPFlash once)包括：

Sfi I	GGCCN,NNN`NGGCC	9	EcoN I	CCTNN`N,NNAGG	3078
Bgl I	GCCN,NNN`NGGC	9	BsiC I	TT`CG,AA	3473
Acc65 I	G`GTAC,C	15	BstB I	T`CG,AA	3473
Asp718	G`GTAC,C	15	Sal I	G`TCGA,C	3487
Kpn I	G,GTAC`C	19	ApaL I	G`TGCA,C	4051
Sac I	G,AGCT`C	111	Not I	GC`GGCC,GC	4557
Mlu I	A`CGCG,T	113	BstX I	CCAN,NNNN`NTGG	4581
Bgl II	A`GATC,T	119	BstE II	G`GTNAC,C	4584
HinD III	A`AGCT,T	129	Ahd I	GACNN,N`NNGTC	4659
BsrG I	T`GTAC,A	695	Bsu36 I	CC`TNA,GG	5015
Dra III	CAC,NNN`GTG	1351	Pvu I	CG,AT`CG	5029
Gsu I	CTGGAG 21/19	1584	Sac II	CC,GC`GG	5053
Bpm I	CTGGAG 22/20	1585	Bst1107 I	GTA|TAC	5169
Apo I	R`AATT,Y	1967	Xca I	GTA|TAC	5169
Mun I	C`AATT,G	2031	Spe I	A`CTAG,T	5488
BamH I	G`GATC,C	2124	BsmA I	GTCTC`/9	5500
Stu I	AGG|CCT	2557	BsmB I	CGTCTC 7/11	5501

FOPFlash质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

RVprimer3(5652-5671)：

CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

FOPFlash质粒的全序列信息：D2503FOPFlash全序列.txt

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D2503-1μg	FOPFlash(报告基因质粒)	1μg
D2503-100μg	FOPFlash(报告基因质粒)	100μg
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.FOPFlash可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用碧云天的萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
图1. 293a细胞分别转染TOPFlash和FOPFlash质粒24小时，再用20mM的氯化锂(LiCl)刺激24小时，最后用碧云天的萤光素酶报告酶基因检测试剂盒(RG005)进行报告基因的检测。氯化锂是Wnt信号通路中GSK3β的抑制剂。本图仅作参考，不同的样品不同的检测条件，实际测定获得的结果可能和上图有较明显的差别。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D2501	TOPFlash(报告基因质粒)	1µg
D2503	FOPFlash(报告基因质粒)	1µg
D2505	SuperTOPFlash(报告基因质粒)	1µg
D2507	SuperFOPFlash(报告基因质粒)	1μg
D2760	pRL-TK(报告基因质粒)	1µg
D2806	pCMV-β-Galactosidase	1µg
RG005	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒	100次
RG006	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒	1000次
RG016	海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒	100次
RG017	海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒	1000次
RG027	双萤光素酶报告基因检测试剂盒	100次
RG028	双萤光素酶报告基因检测试剂盒	1000次
RG0036	β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒	200次