FOPFlash(报告基因质粒)
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产品编号 D2503-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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FOPFlash(报告基因质粒)是TOPFlash(D2501)的阴性对照报告基因质粒。

FOPFlash质粒是以碧云天的pGL6-TA为模板,在其多克隆位点插入突变的TCF/LEF结合位点序列;它包括两组突变的TCF/LEF结合位点序列,每组中有三个重复序列,一组为正向序列,另一组是它的反向互补序列。

FOPFlash质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
TCF binding sites(mutant) 20-105
Minimal TA promoter (pTA) 140-162
luc2 reporter gene 194-1856
SV40 late poly(A) signal 1891-2112
SV40 early enhancer/promoter 2160-2578
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region 2603-3397
Synthetic poly(A) signal 3422-3470
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 3537-3556
ColE1-derived plasmid replication origin 3794
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 4585-5445
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 5550-5703
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 5652-5671

FOPFlash质粒的图谱如下:

FOPFlash质粒的TCF binding sites(mutant)序列详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2503 SuperTOPFlash(报告基因质粒).pdf

FOPFlash质粒中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut FOPFlash)包括:

Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I BspM II
BssH II Eco72 I EcoR I EcoR V Nde I Nhe I Nru I PaeR7 I
PflM I Pme I Pml I Psp1406 I PspA I Rsr II Sma I SnaB I
Spl I Srf I Tth111 I Vsp I Xcm I Xho I

FOPFlash质粒中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut FOPFlash once)包括:

Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3078
Bgl I GCCN,NNN`NGGC 9 BsiC I TT`CG,AA 3473
Acc65 I G`GTAC,C 15 BstB I T`CG,AA 3473
Asp718 G`GTAC,C 15 Sal I G`TCGA,C 3487
Kpn I G,GTAC`C 19 ApaL I G`TGCA,C 4051
Sac I G,AGCT`C 111 Not I GC`GGCC,GC 4557
Mlu I A`CGCG,T 113 BstX I CCAN,NNNN`NTGG 4581
Bgl II A`GATC,T 119 BstE II G`GTNAC,C 4584
HinD III A`AGCT,T 129 Ahd I GACNN,N`NNGTC 4659
BsrG I T`GTAC,A 695 Bsu36 I CC`TNA,GG 5015
Dra III CAC,NNN`GTG 1351 Pvu I CG,AT`CG 5029
Gsu I CTGGAG 21/19 1584 Sac II CC,GC`GG 5053
Bpm I CTGGAG 22/20 1585 Bst1107 I GTA|TAC 5169
Apo I R`AATT,Y 1967 Xca I GTA|TAC 5169
Mun I C`AATT,G 2031 Spe I A`CTAG,T 5488
BamH I G`GATC,C 2124 BsmA I GTCTC`/9 5500
Stu I AGG|CCT 2557 BsmB I CGTCTC 7/11 5501

FOPFlash质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

RVprimer3(5652-5671):

CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

FOPFlash质粒的全序列信息:D2503FOPFlash全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2503-1μg FOPFlash(报告基因质粒) 1μg
D2503-100μg FOPFlash(报告基因质粒) 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.FOPFlash可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用碧云天的萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
图1. 293a细胞分别转染TOPFlash和FOPFlash质粒24小时,再用20mM的氯化锂(LiCl)刺激24小时,最后用碧云天的萤光素酶报告酶基因检测试剂盒(RG005)进行报告基因的检测。氯化锂是Wnt信号通路中GSK3β的抑制剂。本图仅作参考,不同的样品不同的检测条件,实际测定获得的结果可能和上图有较明显的差别。
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使用本产品的文献:
1. Ruihuan Yang, Ruyi Li, Zhuo Huang, Yining Zuo, Haitang Yue, Hailin Wu, Fan Gu, Fei Wang, Miao He, Zhuan Bian
Hum Mol Genet. doi: 10.1093/hmg/ddab288. (IF 5.1)
2. Xiao Ma, Xiaoling Hu, Yijia Zhu, Huixian Jin, Guifen Hu, Linchao Ding, Shilong Ning
Biochem Pharmacol. doi: 10.1016/j.bcp.2022.115299. (IF 4.96)