pUBI10-GUS(报告基因质粒)是是碧云天自行研发的植物(如拟南芥等)原生质体瞬时转染的报告基因质粒。大肠杆菌的β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)作为植物基因研究中常用的报告基因具有以下突出优点:植物原生质体可以比较稳定的表达GUS基因;不干扰植物细胞的正常代谢;β-葡萄糖醛酸酶在高等植物中几乎无内源性表达。质粒为氨苄青霉素抗性。
pUBI10-GUS载体中GUS基因由拟南芥Ubiquitin 10(UBI10)基因启动子驱动表达。如果由花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)组成型强启动子启动GUS基因的表达,会增加植物的代谢负担,造成大量物质和能量的浪费,并进而影响植物正常的生长发育;而UBI10启动子不仅可以高效启动下游基因的表达,也可以比较好的规避CaMV35S的缺点。
pUBI10-GUS中UBI10 promoter的上下游有数个酶切位点,可利用其对UBI10 promoter进行其它启动子的替换,用以研究感兴趣的启动子的功能。
pUBI10-GUS载体仅保留植物瞬时转化所需元件,结构精简,避免由于载体过大导致原生质体转化效率降低。此载体不可用于植物稳定遗传株系的构建。
pUBI10-GUS采用来自根瘤农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子NOS terminator (nopaline synthase terminator),用于终止RNA聚合酶转录,对目的基因的表达进行调控。
pUBI10-GUS质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
NOS terminator | 1-253 |
M13 forward primer(M13 fwd) | 262-278 |
f1 origin of ss-DNA replication | 491-946 |
Ampicillin promoter | 1228-1332 |
Ampicillin resistance ORF | 1333-2193 |
pUC origin | 2364-2952 |
CAP binding site | 3240-3261 |
lac promoter | 3276-3306 |
lac operator | 3314-3330 |
M13 reverse primer(M13 rev) | 3338-3354 |
UBI10 promoter | 3388-4704 |
β-glucuronidase(GUS) | 4732-6543 |
pUBI10-GUS质粒(6614bp)的图谱如下:
pUBI10-GUS的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2491 pUBI10-GUS(植物报告基因质粒).pdf
pUBI10-GUS中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUBI10-GUS)包括:
Acc65I | AfeI | AgeI | ApaI | AscI | AsiSI |
AvrII | BamHI | BbvCI | BlpI | BmgBI | BmtI |
BseRI | BsiWI | BspDI | BspEI | BstAPI | BstEII |
BstXI | BstZ17I | Bsu36I | ClaI | CspCI | EagI |
EcoNI | FseI | HpaI | KpnI | NcoI | NdeI |
NheI | NotI | PacI | PaeR7I | PflMI | PmeI |
PspOMI | PspXI | RsrII | SacII | SexAI | SfiI |
SgrAI | SpeI | SphI | SrfI | StuI | StyI |
SwaI | XcmI | XhoI |
pUBI10-GUS中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUBI10-GUS once)包括:
AatII | G,ACGT`C | 1197 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 1970 |
AflII | A`CRYG,T | 30 | NsiI | A,TGCA`T | 121 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2121 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4267 |
BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 3673 | PluTI | G,GCGC`C | 417 |
BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 4508 | PmlI | CAC|GTG | 4216 |
BglII | A`GATC,T | 4634 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3925 |
BpmI | CTGGAG(N)14,NN` | 2049 | PshAI | GACNN|NNGTC | 5305 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 2055 | PstI | C,TGCA`G | 3387 |
BseYI | C`CCAG,C | 2704 | SbfI | CC,TGCA`GG | 3382 |
BsgI | GTGCAG(N)14,NN` | 6251 | ScaI | AGT|ACT | 1640 |
BsmI | GAATG,CN` | 4787 | SfoI | GGC|GCC | 419 |
BstBI | TT`CG,AA | 5825 | SmaI | CCC|GGG | 4714 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 721 | SnaBI | TAC|GTA | 5116 |
HindIII | A`AGCT,T | 3368 | TspMI | CCCGG,G | 4711 |
KasI | G`GCGC,C | 417 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4267 |
MfeI | C`AATT,G | 4862 | XmaI | C`CCGG,G | 4711 |
MscI | TGG|CCA | 5353 | ZraI | GAC|GTC | 1199 |
NarI | GG`CG,CC | 418 |
pUBI10-GUS质粒可使用的测序引物序列如下:
GUS promoter primer(4744-4762): 5'-CACGGGTTGGGGTTTCTAC-3'
M13 reverse primer(3338-3354): 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'
pUBI10-GUS的全序列信息:D2491 pUBI10-GUS.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2491-1µg | pUBI10-GUS | 1μg |
D2491-100µg | pUBI10-GUS | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C0362S | 植物原生质体分离试剂盒 | 5mlx20次 |
C0563S | 植物原生质体转染试剂盒 | 100次 |
C0563M | 植物原生质体转染试剂盒 | 500次 |
D2489-1µg | pRD29B-luc (植物报告基因质粒) | 1µg |
D2489-100µg | pRD29B-luc (植物报告基因质粒) | 100µg |
D2627-1µg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 1µg |
D2627-100µg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 100µg |
P0043-100ml | 植物Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
P0045-100ml | 植物RIPA裂解液(强) | 100ml |