pRD29B-luc(植物报告基因质粒)是碧云天自行研发的植物(如拟南芥等)原生质体瞬时转染萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因质粒。质粒为氨苄青霉素抗性。
pRD29B-luc载体中Luciferase基因由RD29B诱导型启动子驱动表达。RD29B为拟南芥在脱水,低温或高盐条件下诱导表达的基因,其编码的亲水性蛋白可以提高植物在以上逆境条件下的耐性。RD29B promoter是目前常用的逆境诱导型启动子,在脱落酸(Abscisic Acid,ABA)(ST1751)诱导的情况下,luciferase的表达水平可以大大增强。如果由花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)组成型强启动子启动GUS基因的表达,会增加植物的代谢负担,造成大量物质和能量的浪费,并进而影响植物正常的生长发育;而RD29B promoter启动子不仅可以高效启动下游基因的表达,也可以比较好的规避CaMV35S的缺点。
pRD29B-luc中RD29B promoter的上下游有数个酶切位点,可利用其对RD29B promoter进行其它启动子的替换,用以研究感兴趣的启动子的功能。
pRD29B-luc载体仅保留植物瞬时转化所需元件,结构精简,避免由于载体过大导致原生质体转化效率降低。此载体不可用于植物稳定遗传株系的构建。
pRD29B-luc采用来自根瘤农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(nopaline synthase terminator,NOS-T),用于终止RNA聚合酶转录,对目的基因的表达进行调控。
pRD29B-luc质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
Ampicillin resistance ORF | 137-997 |
Ampicillin promoter | 998-1102 |
M13 forward primer(M13 fwd) | 1576-1592 |
RD29B promoter | 1646-2226 |
Luciferase | 2229-3881 |
NOS terminator | 4036-4288 |
M13 reverse primer(M13 rev) | 4307-4323 |
lac operator | 4331-4347 |
lac promoter | 4355-4385 |
CAP binding site | 4400-4421 |
pUC origin | 4709-5297 |
pRD29B-luc质粒(5479bp)的图谱如下:
pRD29B-luc的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2489 pRD29B-luc(植物报告基因质粒).pdf
pRD29B-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pRD29B-luc)包括:
Acc65I | AccI | AfeI | AgeI | AleI | ApaI | AscI |
AsiSI | AvrII | BaeI | BbvCI | BclI | BlpI | BmtI |
Bpu10I | BsgI | BsmI | BstXI | BstZ17I | EagI | FseI |
HpaI | KpnI | MluI | MscI | NaeI | NgoMIV | NheI |
NotI | NruI | PaeR7I | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI |
PshAI | PspOMI | PspXI | RsrII | SacII | SalI | SexAI |
SfiI | SmaI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI |
TspMI | Tth111I | XhoI | XmaI |
pRD29B-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pRD29B-luc once)包括:
AatII | G,ACGT`C | 1128 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 1884 |
AflII | A`CRYG,T | 4065 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 3846 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 211 | EcoRV | GAT|ATC | 3567 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 5061 | HincII | GTY|RAC | 3533 |
AvaI | C`YCGR,G | 3285 | HindIII | A`AGCT,T | 1597 |
BamHI | G`GATC,C | 1622 | NcoI | C`CATG,G | 2228 |
BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3627 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 357 |
BglII | A`GATC,T | 4285 | NsiI | A,TGCA`T | 4152 |
BmgBI | CAC|GTC | 2030 | PacI | TTA,AT`TAA | 3551 |
BsaBI | GATNN|NNATC | 4099 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3408 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 272 | PsiI | TTA|TAA | 2554 |
BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 3782 | PstI | C,TGCA`G | 1613 |
BsoBI | C`YCGR,G | 3285 | SbfI | CC,TGCA`GG | 1608 |
BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3627 | ScaI | AGT|ACT | 691 |
BsrGI | T`GTAC,A | 2719 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 3657 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 1379 | StyI | C`CWWG,G | 2227 |
BstEII | G`GTNAC,C | 2837 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 2963 |
Bsu36I | CC`TNA,GG | 2842 | XmnI | GAANN|NNTTC | 809 |
BtgI | C`CRYG,G | 2227 | ZraI | GAC|GTC | 1130 |
CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1904 |
pRD29B-luc质粒可使用的测序引物序列如下:
M13 forward primer(1576-1592): 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'
luc promoter primer(2558-2274): 5'-GATAGAATGGCGCCGGG-3'
pRD29B-luc的全序列信息:D2489 pRD29B-luc.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2489-1µg | pRD29B-luc | 1μg |
D2489-100µg | pRD29B-luc | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ST1751-100mg | (+) - Abscisic Acid (脱落酸, ≥98%, BioReagent) | 100mg |
ST1751-500mg | (+) - Abscisic Acid (脱落酸, ≥98%, BioReagent) | 500mg |
C0362S | 植物原生质体分离试剂盒 | 5mlx20次 |
C0563S | 植物原生质体转染试剂盒 | 100次 |
C0563M | 植物原生质体转染试剂盒 | 500次 |
D2491-1µg | pUBI10-GUS (植物报告基因质粒) | 1µg |
D2491-100µg | pUBI10-GUS (植物报告基因质粒) | 100µg |
D2627-1µg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 1µg |
D2627-100µg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 100µg |
P0043-100ml | 植物Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
P0045-100ml | 植物RIPA裂解液(强) | 100ml |