碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA-Template (体外转录质粒)是碧云天研发的一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的模板质粒。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段)，不仅可以作为插入目的基因用于体外转录的模板质粒，也可以作为体外转录的阳性对照。体外转录的RNA可以用于mRNA疫苗、体外蛋白翻译、转染细胞用于目的基因的表达、体外研究翻译调控机制、体外研究RNA降解机制、蛋白与RNA的相互作用等。

当本质粒用HindIII等插入片段后边的限制性内切酶线性化处理之后，就可作为体外转录的模板。

本质粒用HindIII线性化之后，当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时，获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt，并且获得的RNA是与人β-actin mRNA互补的。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA Polymerase、R7009 T3 RNA Polymerase和R7012 T7 RNA Polymerase。

本质粒线性化之后转录产生的RNA可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针，也可以在Northern blot和Dot blot中作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考等。

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Ampicillin promoter	96-200
Ampicillin resistance ORF	201-1061
ori	1232-1820
lac promoter	2144-2174
lac operator	2182-2198
M13 reverse primer binding site	2206-2222
T3 promoter	2238-2257
SP6 promoter	2261-2280
T7 promoter	2284-2303
β-actin-125-Human Antisense Template	2327-2451
Multiple cloning site	2307-2326/2452-2480
M13 forward primer binding site	2484-2500

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒(2878bp)的图谱如下：

pT3/SP6/T7-RNA-Template的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2310 pT3/SP6/T7-RNA-Template (RNA体外转录质粒).pdf。

pT3/SP6/T7-RNA-Template中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pT3/SP6/T7-RNA-Template)包括：

AccI	AfeI	AflII	AgeI	AleI	ApaI	AscI
AsiSI	AvrII	BaeI	BbsI	BbvCI	BclI	BfuAI
BglII	BlpI	BmtI	Bpu10I	BsaAI	BsaBI	BseRI
BsgI	BsiWI	BsmFI	BsmI	BspDI	BspEI	BspMI
BsrGI	BssHII	BstBI	BstEII	BstXI	BstZ17I	Bsu36I
BtgZI	ClaI	CspCI	DraIII	EcoNI	EcoRV	FseI
HincII	HpaI	HindIII	MfeI	MluI	MscI	NaeI
NcoI	NgoMIV	NheI	NruI	NsiI	PacI	PaeR7I
PaqCI	PflFI	PflMI	PmeI	PmlI	PpuMI	PshAI
PsiI	PspOMI	PspXI	RsrII	SalI	SbfI	SexAI
SfiI	SgrAI	SnaBI	SpeI	SphI	SrfI	StuI
StyI	SwaI	Tth111I	XcmI	XhoI

pT3/SP6/T7-RNA-Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA-Template)包括：

AatII	G,ACGT`C	65	HindIII	A`AGCT,T	2476
Acc65I	G`GTAC,C	2315	KasI	G`GCGC,C	2639
AflIII	A`CRYG,T	1876	KpnI	G,GTAC`C	2135
AhdI	GACNN,N`NNGTC	987	NarI	GG`CG,CC	2640
AlwNI	CAG,NNN`CTG	1464	NdeI	CA`TA,TG	2692
AvaI	C`YCGR,G	2458	NmeAIII	GCCGAG(N)19,NN`	838
BamHI	G`GATC,C	2463	NotI	GC`GGCC,GC	2308
BanII	G,RGCY`C	2452	PciI	A`CATG,T	838
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	450	PluTI	G,GCGC`C	2308
BmgBI	CAC|GTC	2374	PstI	C,TGCA`G	1876
BpmI	CTGGAG(N)14,NN`	917	SacI	G,AGCT`C	2639
BsaI	GGTCTCN`NNNN,	922	SacII	CC,GC`GG	2321
BsaXI	,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	2008	SapI	GCTCTTCN`NNN,	2452
BseYI	C`CCAG,C	1527	ScaI	AGT|ACT	2312
BsoBI	C`YCGR,G	2458	SfoI	GGC|GCC	1993
BspQI	GCTCTTCN`NNN,	1993	SmaI	CCC|GGG	507
BsrFI	R`CCGG,Y	903	SspI	AAT|ATT	2461
BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	2693	TspMI	C`CCGG,G	2460
BtgI	C`CRYG,G	2311	XbaI	T`CTAG,A	183
EagI	C`GGCC,G	2308	XmaI	C`CCGG,G	2458
Eco53kI	GAG|CTC	2454	XmnI	GAANN`NNTTC	388
EcoO109I	RG`GNC,CY	8
EcoRI	G`AATT,C	2232

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

M13 forward primer (2484-2500): 5´-GTAAAACGACGGCCAGT-3´

M13 reverse primer (2206-2222): 5´-CAGGAAACAGCTATGAC-3´

pT3/SP6/T7-RNA-Template的全序列信息：D2310 pT3_SP6_T7-RNA Template全序列.txt

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D2310-1µg	pT3/SP6/T7-RNA-Template	1μg
D2310-100µg	pT3/SP6/T7-RNA-Template	100μg
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl，共1ml。可以直接用HindIII等限制性内切酶线性化处理之后进行体外转录。也可在其多克隆位点适当酶切后插入待体外转录的目的基因，或者也可以用无缝克隆技术插入目的基因，构建的质粒可以通过蓝白斑筛选阳性克隆，最终也可以在线性化后进行体外转录。具体的体外转录反应体系可以参考碧云天生产的 T7 RNA Polymerase (R7012)、 SP6 RNA Polymerase (R7006)和T3 RNA Polymerase (R7009)。