碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template是一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的线性化质粒模板。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段),已经用HindIII限制性内切酶进行了线性化处理,可以直接使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的任何一种进行体外转录。从本线性化模板可以转录产生与人β-actin mRNA互补的RNA探针,也可以用于测定T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的活性。
当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时,获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA Polymerase、R7009 T3 RNA Polymerase和R7012 T7 RNA Polymerase。
从该模板合成的转录产物可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针;在Northern和Dot blots中可作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考;与人总RNA杂交可保护人β-actin mRNA的125个核苷酸片段不被RNase A和RNase T1消化。
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
Ampicillin promoter | 96-200 |
Ampicillin resistance ORF | 201-1061 |
ori | 1232-1820 |
lac promoter | 2144-2174 |
lac operator | 2182-2198 |
M13 reverse primer binding site | 2206-2222 |
T3 promoter | 2238-2257 |
SP6 promoter | 2261-2280 |
T7 promoter | 2284-2303 |
β-actin-125-Human Antisense Template | 2327-2451 |
Multiple cloning site | 2307-2326/2452-2480 |
M13 forward primer binding site | 2484-2500 |
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒(2878bp)的图谱如下:
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2308 pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template (RNA体外转录质粒).pdf。
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括:
AccI | AfeI | AflII | AgeI | AleI | ApaI | AscI |
AsiSI | AvrII | BaeI | BbsI | BbvCI | BclI | BfuAI |
BglII | BlpI | BmtI | Bpu10I | BsaAI | BsaBI | BseRI |
BsgI | BsiWI | BsmFI | BsmI | BspDI | BspEI | BspMI |
BsrGI | BssHII | BstBI | BstEII | BstXI | BstZ17I | Bsu36I |
BtgZI | ClaI | CspCI | DraIII | EcoNI | EcoRV | FseI |
HincII | HpaI | HindIII | MfeI | MluI | MscI | NaeI |
NcoI | NgoMIV | NheI | NruI | NsiI | PacI | PaeR7I |
PaqCI | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI |
PsiI | PspOMI | PspXI | RsrII | SalI | SbfI | SexAI |
SfiI | SgrAI | SnaBI | SpeI | SphI | SrfI | StuI |
StyI | SwaI | Tth111I | XcmI | XhoI |
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括:
AatII | G,ACGT`C | 65 | KasI | G`GCGC,C | 2639 |
Acc65I | G`GTAC,C | 2315 | KpnI | G,GTAC`C | 2135 |
AflIII | A`CRYG,T | 1876 | NarI | GG`CG,CC | 2640 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 987 | NdeI | CA`TA,TG | 2692 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1464 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 838 |
AvaI | C`YCGR,G | 2458 | NotI | GC`GGCC,GC | 2308 |
BamHI | G`GATC,C | 2463 | PciI | A`CATG,T | 838 |
BanII | G,RGCY`C | 2452 | PluTI | G,GCGC`C | 2308 |
BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 450 | PstI | C,TGCA`G | 1876 |
BmgBI | CAC|GTC | 2374 | SacI | G,AGCT`C | 2639 |
BpmI | CTGGAG(N)14,NN` | 917 | SacII | CC,GC`GG | 2321 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 922 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2452 |
BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2008 | ScaI | AGT|ACT | 2312 |
BseYI | C`CCAG,C | 1527 | SfoI | GGC|GCC | 1993 |
BsoBI | C`YCGR,G | 2458 | SmaI | CCC|GGG | 507 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1993 | SspI | AAT|ATT | 2461 |
BsrFI | R`CCGG,Y | 903 | TspMI | C`CCGG,G | 2460 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 2693 | XbaI | T`CTAG,A | 183 |
BtgI | C`CRYG,G | 2311 | XmaI | C`CCGG,G | 2458 |
EagI | C`GGCC,G | 2308 | XmnI | GAANN`NNTTC | 388 |
Eco53kI | GAG|CTC | 2454 | ZraI | GAC|GTC | 67 |
EcoO109I | RG`GNC,CY | 8 | |||
EcoRI | G`AATT,C | 2232 |
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的全序列信息:D2308 pT3_SP6_T7 RNA Template (Linearized)全序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2308-10µg | pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template | 10μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:如果用于制备RNA探针并用于RNase Protection Assay (RPA)实验,即Nuclease Protection Assay (NPA)实验,建议对制备的RNA探针进行PAGE纯化。
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。