pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)
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产品编号 D2209-100μg
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pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测NFκB转录活性水平的报告基因质粒。 pNFκB-TA-GLuc-Dura是以碧云天的pGLuc-Dura-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个NFκB结合位点,可以高灵敏度地检测NFκB的激活水平。

pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒在pGL6-TA (D2105)的基础上进行了改造,使用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。同时该质粒也延续了pGL6-TA的优势,即与Promega pGL3系列质粒相比,对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。

与野生型Gaussia Luciferase相比,突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时,不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点,还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
NFκB response element (κB) 26-65
Minimal TA promoter (pTA) 88-110
GLuc (MT) reporter gene 152-709
SV40 late poly (A) signal 744-965
SV40 early enhancer/promoter 1013-1431
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region 1456-2250
Synthetic poly (A) signal 2275-2323
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 2390-2409
ColE1-derived plasmid replication origin 2647
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 3438-4298
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site 4403-4556
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 4505-4524

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒(4556bp)的图谱如下:

pNFκB-TA-GLuc-Dura的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒).pdf

pNFκB-TA-GLuc-Dura中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pNFκB-TA-GLuc-Dura)包括:

AatII AclI AflII AscI AseI AsiSI AvaI
BmgBI BsaAI BsaI BsiWI BsoBI BspEI BsrGI
BssHII CspCI DraIII Eco53kI EcoRI EcoRV MluI
NdeI PacI PaeR7I PflFI PflMI PmeI PmlI
PspXI RsrII SacI SbfI SmaI SnaBI SrfI
SwaI TspMI Tth111I XcmI XhoI XmaI ZraI

pNFκB-TA-GLuc-Dura中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pNFκB-TA-GLuc-Dura)包括:

Acc65I G`GTAC,C 14 BstZ17I GTA|TAC 4029
Acc65I G`GTAC,C 14 BstZ17I GTA|TAC 4021
AflIII A`CRYG,T 2589 Bsu36I CC`TNA,GG 3867
AgeI A`CCGG,T 2260 EcoNI CCTNN`N,NNAGG 1930
AleI CACNN|NNGTG 3431 Esp3I CGTCTCN`NNNN, 4353
ApaI G,GGCC`C 1526 FspI TGC|GCA 1014
BaeI ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 1656 HindIII A`AGCT,T 77
BamHI G`GATC,C 976 HpaI GTT|AAC 874
BbvCI CC`TCA,GC 2141 KpnI G,GTAC`C 19
BciVI GTATCC(N)5,N` 2791 MfeI C`AATT,G 883
BcoDI GTCTCN`NNNN, 4353 NheI G`CTAG,C 21
BglI GCCN,NNN`NGGC 9 NotI GC`GGCC,GC 3409
BglII A`GATC,T 67 NruI TCG|CGA 257
BmtI G,CTAG`C 20 PciI A`CATG,T 2589
BpmI CTGGAG(N)14,NN` 330 PsiI TTA|TAA 854
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 144 PspOMI G`GGCC,C 1526
BsmAI GTCTCN`NNNN, 4353 PvuII CAG|CTG 1086
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 4353 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 5
BspHI T`CATG,A 3309 SgrAI CR`CCGG,YG 1672
BssSI C`ACGA,G 2762 SpeI A`CTAG,T 4340
BstBI TT`CG,AA 2325 StuI AGG|CCT 1409
BstEII G`GTNAC,C 3436 XmnI GAANN|NNTTC 413
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 3429

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒可使用的测序引物序列如下:

RVprimer3 (4505-4524): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pNFκB-TA-GLuc-Dura的全序列信息:D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura(报告基因质粒).txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2209-1µg pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1μg
D2209-100µg pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 100μg
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pNFκB-TA-GLuc-Dura可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因检测试剂盒检测Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶的表达水平。
4.TNF-α、IL-1β和LPS等是常见的可以激活NFκB的试剂,可以用作pNFκB-TA-GLuc-Dura报告基因检测时的阳性对照。
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