pGLuc (报告基因质粒)
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产品编号 D2098-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pGLuc (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia Luciferase (Gluc)萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒在pGL6 (D2102)的基础上进行了改造,用野生型(wild type, WT)的Gaussia Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。同时该质粒也延续了pGL6的优势,即与Promega pGL3系列质粒相比,对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。

pGLuc (报告基因质粒)主要用于在其多克隆位点插入特定启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。本质粒为氨苄青霉素抗性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pGLuc质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Multiple cloning region 1-59
GLuc (WT) reporter gene 89-646
SV40 late poly (A) signal 677-898
SV40 early enhancer/promoter 946-1364
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region 1389-2183
Synthetic poly (A) signal 2208-2256
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 2323-2342
ColE1-derived plasmid replication origin 2580
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 3371-4231
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site 4336-4489
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 4438-4457

pGLuc质粒(4489bp)的图谱如下:

pGLuc的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2098 pGLuc (报告基因质粒).pdf

pGLuc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGLuc)包括:

AatII AclI AflII AscI AsiSI BmgBI BpmI
BsaAI BsaI BsiWI BspEI BssHII CspCI DraIII
EcoRI EcoRV NdeI NruI PacI PflFI PflMI
PmeI PmlI RsrII SbfI SmaI SnaBI SrfI
SwaI TspMI Tth111I XcmI XmaI XmnI ZraI

pGLuc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGLuc)包括:

Acc65I G`GTAC,C 14 Eco53kI GAG|CTC 34
AgeI A`CCGG,T 2193 EcoNI CCTNN`N,NNAGG 1863
AhdI GACNN,N`NNGTC 3443 Esp3I CGTCTCN`NNNN, 4286
AleI CACNN|NNGTG 3364 FspI TGC|GCA 947
ApaI G,GGCC`C 1459 HindIII A`AGCT,T 55
AseI AT`TA,AT 643 HpaI GTT|AAC 807
AvaI C`YCGR,G 26 KpnI G,GTAC`C 19
BaeI ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 1589 MfeI C`AATT,G 816
BamHI G`GATC,C 909 MluI A`CGCG,T 39
BbvCI CC`TCA,GC 2074 NotI GC`GGCC,GC 3342
BciVI GTATCC(N)5,N` 2724 PaeR7I C`TCGA,G 26
BglI GCCN,NNN`NGGC 9 PciI A`CATG,T 2522
BglII A`GATC,T 45 PsiI TTA|TAA 787
BsaBI GATNN|NNATC 908 PspOMI G`GGCC,C 1459
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 81 PspXI VC`TCGA,GB 26
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 4286 PvuI CG,AT`CG 3812
BsoBI C`YCGR,G 26 PvuII CAG|CTG 1019
BspHI T`CATG,A 3242 SacI G,AGCT`C 37
BsrGI T`GTAC,A 332 SacII CC,GC`GG 3836
BssSI C`ACGA,G 2695 SalI G`TCGA,C 2272
BstBI TT`CG,AA 2258 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 5
BstEII G`GTNAC,C 3369 SgrAI CR`CCGG,YG 1605
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 3362 SpeI A`CTAG,T 4273
BstZ17I GTA|TAC 3954 StuI AGG|CCT 1342
Bsu36I CC`TNA,GG 3800 XhoI C`TCGA,G 27

pGLuc质粒可使用的测序引物序列如下:

RVprimer3 (4438-4457): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pGLuc的全序列信息: D2098 pGLuc (报告基因质粒).txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2098-1µg pGLuc (报告基因质粒) 1μg
D2098-100µg pGLuc (报告基因质粒) 100µg
说明书 1份
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.用于插入调控序列:在多克隆位点选取适当的酶切位点,经酶切处理后连入适当的基因转录调控序列。pGLuc也可以用作报告基因检测时的阴性对照。
4.pGLuc质粒以及以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的Gaussia Luciferase萤光素酶报告基因检测试剂盒检测Gaussia Luciferase萤光素酶的表达水平。
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