OrigamiB(DE3)pLysS超级感受态细胞
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产品编号 D1061S
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¥ 388.00
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10×100μl 50×100μl
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碧云天生产的OrigamiB(DE3)pLysS超级感受态细胞,英文名OrigamiB(DE3)pLysS Super Competent Cells ,是一种可以用于精确控制重组蛋白表达水平的表达用E. coli. OrigamiB(DE3)pLysS即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达108cfu/μg DNA。

OrigamiB(DE3)pLysS兼顾了BL21, Tuner, 和Origami几个表达菌株的优势,即便是有毒性,富含二硫键,极不稳定的重组蛋白,也可以活性形式得到高水平表达。

OrigamiB(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶(T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达),适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白[1]。

OrigamiB(DE3)pLysS表达突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor),这两个酶是还原途径的关键酶,突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。

OrigamiB(DE3)pLysS染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

OrigamiB(DE3)pLysS具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有氯霉素,卡那霉素抗性质粒的表达。

OrigamiB(DE3)pLysS的基因型F-ompT hsdSB(rB-mB-)galdcmlacY1ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB(KanR,TetR)pLysSCamR

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D1061S OrigamiB(DE3)pLysS超级感受态细胞 10×100μl
D1061M OrigamiB(DE3)pLysS超级感受态细胞 50×100μl
说明书 1份
保存条件:

-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项:

感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀,立即冰浴静置30min注意:所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30min并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
3. 热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4. 复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增,复苏培养10-20分钟也完全足够了;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议严格进行复苏培养操作。
5. 收菌涂板。约5000g室温离心1min,沉淀细菌,吸除约900-950μl上清,余下的约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注意:如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献:
1. Naoto K, Hiroshi U,Yoshiyuki O, et al. Fv fragments. 2004,327(2), 241–246.
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