ArcticExpress(DE3)超级感受态细胞
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产品编号 D1001S
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¥ 388.00
产品包装:
10×100μl 50×100μl
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碧云天生产的 ArcticExpress(DE3)超级感受态细胞,英文名ArcticExpress(DE3) Super Competent Cells ,是一种既可表达可溶性重组蛋白,同时用于常规质粒高效转化的表达用E. coli ArcticExpress(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×108cfu/μg DNA。

ArcticExpress(DE3)来源于E. coli B,为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。ArcticExpress(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress (DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

ArcticExpress(DE3)组成型表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10 and Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress(DE3)细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融性能[1]。

ArcticExpress(DE3)具有四环素,庆大霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。

ArcticExpress(DE3)菌株的基因型E.coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D1001S ArcticExpress(DE3)超级感受态细胞 10×100μl
D1001M ArcticExpress(DE3)超级感受态细胞 50×100μl
说明书 1份
保存条件:

-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项:

感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀,立即冰浴静置30min注意:所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30min并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
3. 热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4. 复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增,复苏培养10-20分钟也完全足够了;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议严格进行复苏培养操作。
5. 收菌涂板。约5000g室温离心1min,沉淀细菌,吸除约900-950μl上清,余下的约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注意:如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献:
1.Hartinger D,Heinl S, Schwartz H E, et al. Enhancement of solubility in Escherichia coli and purification of an aminotransferase from Sphingopyxis sp. MTA144 for deamination of hydrolyzed fumonisin B1. Microb Cell Fact, 2010(9): 62.
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