碧云天生产的EPI300甘油菌(EPI300 Glycerol Stock)，是收集生长在对数期的EPI300甘油菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。本甘油菌可以直接划平板或小量、大量培养。

EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝复制，在非诱导情况下，当含有oriV复制子质粒的EPI300菌株在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，oriV复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂，例如碧云天的CopyCutter Induction Solution (200X) (D0356)后，oriV复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，进而提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低oriV复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (例如哺乳动物基因组DNA等)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。

EPI300菌株基因型：F–mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr

本菌株可以使用常规的2YT/LB或SOB培养基进行培养。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0357	EPI300甘油菌	200μl
－	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，至少3个月有效。-80℃保存至少2年有效。尽量避免反复冻融。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.划平板接种：
取出甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和固体培养基平板接近平行的角度，在含50μg/ml链霉素的固体培养基平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90º或120º角，再在固体培养基平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量甘油菌，在含50μg/ml链霉素的固体培养基平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90º或120º角，再在固体培养基平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养：
取出甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml细菌培养基(50μg/ml链霉素)试管内或装有100ml或更大体积 (50μg/ml链霉素)的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备：
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)、超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)进行感受态细胞的制备。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0337	BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株)	200µl
D0339	BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白诱导表达用)	200µl
D0346	DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株)	200µl
D0351	DH5α甘油菌	200µl
D0355	EPI400甘油菌(诱导型高拷贝质粒菌株)	200µl
D0360	JM109甘油菌	200µl
D0361	JM110甘油菌(Dam和Dcm甲基化缺陷菌株)	200µl
D0371	Rosetta(DE3)甘油菌(密码子兼容的蛋白诱导表达)	200µl
D0378	Stbl3甘油菌(慢病毒等逆转录病毒载体扩增用)	200µl
D0389	TG1甘油菌	200µl
D0390	TOP10甘油菌	200µl
D0391	细菌冻存液	50ml
D0301	一步法感受态细菌制备试剂盒	200次
D0302	超级感受态细菌制备试剂盒	100次
D0303	农杆菌感受态制备试剂盒	100次