碧云天生产的BL21-Gold(DE3)甘油菌(BL21-Gold(DE3) Glycerol Stock)，是取在对数生长期的BL21-Gold(DE3)菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成，可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株来源于E.coli B，是BL21系列细胞的改进版，可同时用作蛋白表达菌株和质粒克隆菌株，同样适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。

BL21-Gold(DE3)，具有Hte表型，该表型有效增加了细胞的质粒转染效率；本菌株内的endonuclease I (endA)编码基因失活，可避免endA在大部分质粒小提时对质粒DNA的快速降解，因此本菌株可以产生高质量的小提DNA，直接用于扩增克隆蛋白表达构建质粒。

BL21-Gold(DE3)缺失位于细胞质中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重组表达蛋白的降解，被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

BL21-Gold(DE3)是利用T7 RNA聚合酶启动进行蛋白表达的载体的高效表达菌株。IPTG可以诱导BL21-Gold(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21-Gold(DE3)菌株适合受T7启动子调控的目的基因通过IPTG诱导表达。在未使用IPTG进行诱导表达时，由于宿主菌内仍然有少量的T7 RNA聚合酶合成，这导致少量的目的蛋白的产生。如果目的蛋白具有毒性，则会抑制细菌生长，甚至导致死亡，因此本菌株不适合表达对细菌有毒性或生长抑制的蛋白。

BL21-Gold(DE3)菌株具有四环素抗性。

BL21-Gold(DE3)菌株基因型：E.coli B F^- ompT hsdS(r_B^- m_B^- ) dcm⁺ Tet^r gal λ(DE3) endA Hte

BL21-Gold(DE3)菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用碧云天生产的质粒小量抽提试剂盒(通用型) (D0007S或D0007M)、质粒中量抽提试剂盒(通用型) (D0020)或质粒大量抽提试剂盒(通用型) (D0028)进行质粒抽提。

本菌株可以使用常规的LB培养基或2YT培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择，可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0343	BL21-Gold(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达兼质粒克隆菌株)	200μl
－	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。-80℃可以长期保存。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.划平板接种：
取出BL21-Gold(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量BL21-Gold(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB或2YT平板接近平行的角度，在LB或2YT平板(含10μg/ml四环素)上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21-Gold(DE3)甘油菌，在含10μg/ml四环素的LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养：
BL21-Gold(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21-Gold(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml LB或2YT (含10μg/ml四环素)的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积LB或2YT (含10μg/ml四环素)的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备：
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)、超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细胞的制备。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0301	一步法感受态细菌制备试剂盒	200次
D0302	超级感受态细菌制备试剂盒	100次
D0337	BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株)	200μl
D0339	BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白诱导表达用)	200μl
D0341	BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白高诱导表达用)	200μl
D0343	BL21-Gold(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达兼质粒克隆菌株)	200μl
D0345	BL21-Gold(DE3)plysS甘油菌(蛋白诱导表达兼质粒克隆菌株)	200μl
D0346	DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株)	200μl
D0351	DH5α甘油菌	200μl
D0353	TOP10甘油菌(常用克隆菌株)	200μl
D0355	EPI400甘油菌(诱导型高拷贝质粒菌株)	200μl
D0356-10ml	CopyCutter Induction Solution (200X)	10ml
D0356-50ml	CopyCutter Induction Solution (200X)	50ml
D0357	EPI300甘油菌(诱导型高拷贝质粒菌株)	200μl
D0359	XL1-Blue甘油菌(高拷贝质粒菌株)	200μl
D0361	JM110甘油菌(Dam和Dcm甲基化缺陷菌株)	200μl
D0371	Rosetta(DE3)甘油菌(密码子兼容的蛋白诱导表达)	200μl
D0373	Origami(DE3)甘油菌(含二硫键活性蛋白表达用)	200μl
D0378	Stbl3甘油菌	200μl
D0389	TG1甘油菌	200μl
D0391	细菌冻存液	50ml