碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，即DNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本试剂盒操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约90分钟即可完成。
如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只适合于DNA oligo的退火，不能用于RNA oligo 的退火。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的Milli-Q水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系：

按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果所用的PCR仪没有热盖，滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：

注1：每8秒下降0.1℃，降至25℃的程序设置，以Bio-Rad的T100为例为：1. 95℃, 2:00; 2. 95º, 0.08, -0.1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 700X; 4. 4℃, ∞。
注2：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为：1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70X; 4. 4℃, ∞。
注3：如果条件有限，也可以将水浴锅加热至95℃，把PCR管放在水浴锅中，或者把煮沸的热水加入到保温杯或保温瓶中，待水温降到95℃时放入PCR管。所用水量控制在1-2小时内自然降温至25℃左右。此方法的退火效果可能会比使用PCR仪略差一些。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。