碧云天生产的TBE PAGE凝胶配制试剂盒(TBE PAGE Gel Preparation Kit)，提供了配制TBE PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制不同浓度的TBE PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。TBE PAGE凝胶主要用于10-3000bp双链核酸或10-3000nt单链核酸的高分辨率电泳分析或纯化，广泛用于限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物分析等。

核酸电泳通常是基于长度来电泳分离DNA或RNA片段的分析技术。将待分析的核酸样品置于凝胶中，核酸由于其糖磷酸主链带负电荷，在电场的作用下向阳极迁移。不同大小的片段能够通过在凝胶中的迁移速度差异来完成分离，较长的分子迁移速度较慢，因为它们在凝胶中的阻力较大。由于分子的大小影响其迁移速度，在一定的时间内，较短的片段比较长的片段更接近阳极[1]。在核酸电泳实验中，常用的有两种凝胶：琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。与琼脂糖凝胶相比，聚丙烯酰胺凝胶具有更高分辨率和灵敏度、低本底染色、所需样品量较少以及准确性和可重复性高等优点[2]。常用于核酸电泳的PAGE凝胶有TBE PAGE凝胶、TBE-Urea PAGE凝胶[3]和EMSA PAGE凝胶等。其中，TBE PAGE凝胶由TBE缓冲液(Tris-硼酸-EDTA)制备，主要用于核酸的非变性电泳，常应用于DNA或RNA片段的高分辨率分析，包括限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物等的分析等实验。

本试剂盒制备的TBE PAGE凝胶无DNase，适合长时间电泳，且分辨率高、分离效果佳。

本试剂盒制备的TBE PAGE凝胶使用常用的TBE电泳液，推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)、TBE (5X premixed powder) (ST723)或TBE (5X) (ST718)。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的TBE PAGE凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0168S-1	30% Acr-Bis (29:1)	100ml
D0168S-2	TBE (5X)	100ml
D0168S-3	凝胶聚合催化剂	0.5g
D0168S-4	TEMED Substitute	0.5ml
—	说明书	1份

保存条件：

TBE (5X)和凝胶聚合催化剂室温保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED Substitute 4ºC避光保存。凝胶聚合催化剂用蒸馏水配制成10%溶液后，分装成小管-20ºC保存，通常半年内有效。

注意事项：

凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后，应当分装成小管-20ºC保存。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。

TEMED Substitute易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

TEMED Substitute易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

如果需要30% Acr-Bis (29:1) (ST003)可向碧云天单独订购。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.准备倒胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳胶的模具，如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)或其它适当模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具(如0.75mm厚度)，以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果，可以选择可灌制较大TBE PAGE凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净，需特别注意不能有SDS残留。
2.10%凝胶聚合催化剂的配制：例如称取0.1g凝胶聚合催化剂，用蒸馏水溶解，并定容至1ml，即为10%凝胶聚合催化剂。
3.常用蛋白电泳胶的模具(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算，上层胶按1.5厘米高度计算，均含约0.3ml的冗余量)参见下表。

Gel Thickness	Volume of Resolving Gel	Volume of Stacking Gel
0.75mm	4.0ml	1.0ml
1.0mm	5.4ml	1.5ml
1.5mm	8.0ml	2.0ml

注：下层胶体积已包含适量冗余，请勿全部用于灌制下层胶，以免灌胶时上层胶高度不够。
4.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制TBE PAGE的分离胶(即下层胶)：
不同浓度的TBE PAGE分离胶的最佳分离范围：

TBE PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
5%胶	~200bp-2kb
10%胶	~50bp-1.5kb
12%胶	~30bp-1.2kb
15%胶	~20bp-1kb
20%胶	~10bp-1kb

成分	配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶	5	10	20	30	40	50
Ultrapure water	3.11	6.23	12.50	18.78	25.01	31.13
30% Acr-Bis (29:1)	0.83	1.67	3.33	5.00	6.67	8.33
TBE (5X)	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.00
10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.10	0.15	0.20	0.30	0.50
TEMED Substitute	0.004	0.008	0.012	0.016	0.024	0.04
成分	配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶	5	10	20	30	40	50
Ultrapure water	2.28	4.56	9.18	13.79	18.35	22.81
30% Acr-Bis (29:1)	1.67	3.33	6.67	10.00	13.33	16.67
TBE (5X)	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.00
10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.10	0.15	0.20	0.30	0.50
TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02
成分	配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶	5	10	20	30	40	50
Ultrapure water	1.95	3.90	7.84	11.79	15.69	19.48
30% Acr-Bis (29:1)	2.00	4.00	8.00	12.00	16.00	20.00
TBE (5X)	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.00
10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.10	0.15	0.20	0.30	0.50
TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02
成分	配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶	5	10	20	30	40	50
Ultrapure water	1.45	2.90	5.84	8.79	11.69	14.48
30% Acr-Bis (29:1)	2.50	5.00	10.00	15.00	20.00	25.00
TBE (5X)	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.00
10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.10	0.15	0.20	0.30	0.50
TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02
成分	配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
20%胶	5	10	20	30	40	50
Ultrapure water	0.61	1.23	2.51	3.79	5.02	6.15
30% Acr-Bis (29:1)	3.33	6.67	13.33	20.00	26.67	33.33
TBE (5X)	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.00
10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.10	0.15	0.20	0.30	0.50
TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

5.按照如下表格配制TBE PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：

成分	配制不同体积TBE PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
4%胶	2	3	4	6	8	10
Ultrapure water	1.31	1.97	2.62	3.93	5.25	6.56
30% Acr-Bis (29:1)	0.27	0.40	0.53	0.80	1.07	1.33
TBE (5X)	0.40	0.60	0.80	1.20	1.60	2.00
10%凝胶聚合催化剂	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.10
TEMED Substitute	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

注1：按照上述顺序依次加入各种试剂，加入TEMED Substitute前先混匀，加入TEMED Substitute后立即混匀，并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡，并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡，可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
注2：通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关，上表中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间，当室温低于25ºC时，可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍，15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。
注3：浓缩胶中可加入适量蓝色、红色或黄色PAGE上层胶染料(500X, 无迁移) (P0710/P0712/P0715)便于上样。
6.具体的电泳步骤，可参考碧云天BeyoGel™ TBE PAGE预制胶系列产品的使用说明(D0171-D0186)。
参考文献：
1.Green MR, Sambrook J. Cold Spring Harb Protoc. 2021. 2021(1).
2.Tietz D, Aldroubi A, Pulyaeva H, Guszczynski T, Garner MM, et al. Electrophoresis. 1992. 13(9-10):614-6.
3.Summer H, Grämer R, Dröge P. J Vis Exp. 2009. (32):1485.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0168S	TBE PAGE凝胶配制试剂盒	30-50gels
D0171S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(5%, 10孔)	10块
D0172S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(5%, 15孔)	10块
D0174S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(10%, 10孔)	10块
D0175S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(10%, 15孔)	10块
D0177S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(12%, 10孔)	10块
D0178S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(12%, 15孔)	10块
D0182S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(15%, 10孔)	10块
D0183S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(15%, 15孔)	10块
D0185S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(4-20%, 10孔)	10块
D0186S	BeyoGel™ TBE PAGE预制胶(4-20%, 15孔)	10块
R0223-500ml	TBE (5X, DNase/RNase free)	500ml
ST718	TBE (5X)	500ml
ST719-500ml	TBE (5X) (DNase, RNase & Protease free, Sterile)	500ml
ST720	TBE (1X premixed powder)	2L
ST721	TBE (1X premixed powder)	10×2L
ST723	TBE (5X premixed powder)	2×2L