TBE PAGE凝胶配制试剂盒
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产品编号 D0168S
数量
¥ 228.00
产品包装:
30-50gels
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碧云天生产的TBE PAGE凝胶配制试剂盒(TBE PAGE Gel Preparation Kit),提供了配制TBE PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制不同浓度的TBE PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。TBE PAGE凝胶主要用于10-3000bp双链核酸或10-3000nt单链核酸的高分辨率电泳分析或纯化,广泛用于限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物分析等。

核酸电泳通常是基于长度来电泳分离DNA或RNA片段的分析技术。将待分析的核酸样品置于凝胶中,核酸由于其糖磷酸主链带负电荷,在电场的作用下向阳极迁移。不同大小的片段能够通过在凝胶中的迁移速度差异来完成分离,较长的分子迁移速度较慢,因为它们在凝胶中的阻力较大。由于分子的大小影响其迁移速度,在一定的时间内,较短的片段比较长的片段更接近阳极[1]。在核酸电泳实验中,常用的有两种凝胶:琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。与琼脂糖凝胶相比,聚丙烯酰胺凝胶具有更高分辨率和灵敏度、低本底染色、所需样品量较少以及准确性和可重复性高等优点[2]。常用于核酸电泳的PAGE凝胶有TBE PAGE凝胶、TBE-Urea PAGE凝胶[3]和EMSA PAGE凝胶等。其中,TBE PAGE凝胶由TBE缓冲液(Tris-硼酸-EDTA)制备,主要用于核酸的非变性电泳,常应用于DNA或RNA片段的高分辨率分析,包括限制性酶切产物、PCR产物、Southern和引物等的分析等实验。

本试剂盒制备的TBE PAGE凝胶无DNase,适合长时间电泳,且分辨率高、分离效果佳。

本试剂盒制备的TBE PAGE凝胶使用常用的TBE电泳液,推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)、TBE (5X premixed powder) (ST723)或TBE (5X) (ST718)。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的TBE PAGE凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0168S-1 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
D0168S-2 TBE (5X) 100ml
D0168S-3 凝胶聚合催化剂 0.5g
D0168S-4 TEMED Substitute 0.5ml
说明书 1份
保存条件:

TBE (5X)和凝胶聚合催化剂室温保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED Substitute 4ºC避光保存。凝胶聚合催化剂用蒸馏水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。

注意事项:

凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,应当分装成小管-20ºC保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

TEMED Substitute易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

TEMED Substitute易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

如果需要30% Acr-Bis (29:1) (ST003)可向碧云天单独订购。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.准备倒胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳胶的模具,如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)或其它适当模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具(如0.75mm厚度),以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果,可以选择可灌制较大TBE PAGE凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净,需特别注意不能有SDS残留。
2.10%凝胶聚合催化剂的配制:例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用蒸馏水溶解,并定容至1ml,即为10%凝胶聚合催化剂。
3.常用蛋白电泳胶的模具(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算,上层胶按1.5厘米高度计算,均含约0.3ml的冗余量)参见下表。
Gel Thickness Volume of Resolving Gel Volume of Stacking Gel
0.75mm 4.0ml 1.0ml
1.0mm 5.4ml 1.5ml
1.5mm 8.0ml 2.0ml
注:下层胶体积已包含适量冗余,请勿全部用于灌制下层胶,以免灌胶时上层胶高度不够。
4.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制TBE PAGE的分离胶(即下层胶):
不同浓度的TBE PAGE分离胶的最佳分离范围:
TBE PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
5%胶 ~200bp-2kb
10%胶 ~50bp-1.5kb
12%胶 ~30bp-1.2kb
15%胶 ~20bp-1kb
20%胶 ~10bp-1kb

成分 配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 3.11 6.23 12.50 18.78 25.01 31.13
30% Acr-Bis (29:1) 0.83 1.67 3.33 5.00 6.67 8.33
TBE (5X) 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04
成分 配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 2.28 4.56 9.18 13.79 18.35 22.81
30% Acr-Bis (29:1) 1.67 3.33 6.67 10.00 13.33 16.67
TBE (5X) 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 1.95 3.90 7.84 11.79 15.69 19.48
30% Acr-Bis (29:1) 2.00 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00
TBE (5X) 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 1.45 2.90 5.84 8.79 11.69 14.48
30% Acr-Bis (29:1) 2.50 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
TBE (5X) 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积TBE PAGE凝胶所需各成分的体积(毫升)
20%胶 5 10 20 30 40 50
Ultrapure water 0.61 1.23 2.51 3.79 5.02 6.15
30% Acr-Bis (29:1) 3.33 6.67 13.33 20.00 26.67 33.33
TBE (5X) 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.50
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
5.按照如下表格配制TBE PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶):
成分 配制不同体积TBE PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
4%胶 2 3 4 6 8 10
Ultrapure water 1.31 1.97 2.62 3.93 5.25 6.56
30% Acr-Bis (29:1) 0.27 0.40 0.53 0.80 1.07 1.33
TBE (5X) 0.40 0.60 0.80 1.20 1.60 2.00
10%凝胶聚合催化剂 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.10
TEMED Substitute 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01
注1:按照上述顺序依次加入各种试剂,加入TEMED Substitute前先混匀,加入TEMED Substitute后立即混匀,并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡,并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡,可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
注2:通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关,上表中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。
注3:浓缩胶中可加入适量蓝色、红色或黄色PAGE上层胶染料(500X, 无迁移) (P0710/P0712/P0715)便于上样。
6.具体的电泳步骤,可参考碧云天BeyoGel™ TBE PAGE预制胶系列产品的使用说明(D0171-D0186)。
参考文献:
1.Green MR, Sambrook J. Cold Spring Harb Protoc. 2021. 2021(1).
2.Tietz D, Aldroubi A, Pulyaeva H, Guszczynski T, Garner MM, et al. Electrophoresis. 1992. 13(9-10):614-6.
3.Summer H, Grämer R, Dröge P. J Vis Exp. 2009. (32):1485.
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