碧云天生产的BeyoMag™磁珠法血液基因组DNA抽提试剂盒(BeyoMag™ Blood Genomic DNA Isolation Kit with Magnetic Beads)是一种基于新型的硅羟基包被的磁珠作为固相介质，用于安全、便捷、稳定、高效、高质量地分离纯化动物血液基因组DNA的试剂盒。

本试剂盒抽提后获得的基因组DNA可以用于基因组DNA的PCR扩增(PCR amplification of genomic DNA)、酶切(Restriction enzyme digestion)、基因分型(Genotyping)、Southern杂交(Southern blot)、高通量测序(High-throughput sequencing, HTS)、基因组DNA文库的构建(Genomic library construction)等各种常规的基因组DNA分析和实验检测。

本试剂盒的原理和主要操作流程如图1所示。血液样品在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解，释放出来的基因组DNA在特定条件下与硅羟基包被的磁珠特异性结合[1]，然后在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与溶液可以快速而高效地分离，再经两次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将基因组DNA从磁珠上洗脱下来，即可获得高质量的基因组DNA。

图1.BeyoMag™磁珠法血液基因组DNA抽提盒(D0091)的基因组DNA抽提原理图。

本试剂盒抽提效果稳定、得率高、纯度好。本试剂盒的基因组DNA抽提体系经过反复优化，稳定性强，得率高，纯度好。100µl人全血中抽提得到约4.5µg基因组DNA，100µl兔全血中抽提得到约5.6µg基因组DNA，且纯度好，A260/A280通常为1.7-1.9。本试剂盒能从低至25µl的哺乳动物全血样品、5µl的有核红细胞抗凝血样品中抽提得到高质量的基因组DNA。本试剂盒与T公司同类产品的抽提效果对比参见图2。

图2.BeyoMag™磁珠法血液基因组DNA抽提试剂盒(D0091)与T公司同类产品的基因组DNA抽提效果对比图。样品为新鲜100μl兔全血，洗脱液用量为50μl。均取8μl洗脱的样品经混合2μl BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) (D0072)，在0.8%琼脂糖凝胶中电泳约30分钟后拍照。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，本图仅供参考。

本试剂盒使用便捷。本试剂盒采用磁珠纯化，整个抽提过程最快约需50分钟。一方面，本试剂盒优化了裂解液成分，仅10分钟就能完成裂解步骤；另一方面，优化了抽提体系，裂解完成后抽提的时间约为35分钟。相比于传统的离心柱式抽提法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间。和国外同类磁珠纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致[2]。

本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠纯化介质进行DNA分离纯化，无须使用酚、氯仿等有毒有害有机试剂。

本产品推荐使用抗凝血液作为样品。对于含无核红细胞的抗凝血液样品(如人全血、小鼠全血等)，建议用量为100-200µl；对于含有核红细胞的抗凝血液样品(如水产类、鸟类、禽类等)，建议用量为5-15µl。本试剂盒也适用于培养动物细胞的基因组DNA提取，建议细胞量为100-200万个。

本试剂盒的小包装、中包装和大包装分别可用于50个、200个和1000个血液基因组DNA样品的提取。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0091S-1	BeyoMag™磁珠	1ml
D0091S-2	裂解液	10ml
D0091S-3	洗涤液	30ml
D0091S-4	洗脱液	5ml
D0091S-5	蛋白酶K	1ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D0091M-1	BeyoMag™磁珠	4ml
D0091M-2	裂解液	40ml
D0091M-3	洗涤液	120ml
D0091M-4	洗脱液	20ml
D0091M-5	蛋白酶K	4ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D0091L-1	BeyoMag™磁珠	16ml
D0091L-2	裂解液	160ml
D0091L-3	洗涤液	480ml
D0091L-4	洗脱液	80ml
D0091L-5	蛋白酶K	16ml
—	说明书	1份

保存条件：

蛋白酶K -20ºC保存，其余室温保存，一年有效。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时，可以4ºC保存，4ºC可以保存更长时间。蛋白酶K室温(15-25ºC)存放一周，活力无明显下降。

注意事项：

需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004/FMS008/FMS012/FMS016/FMS024)。

需自备异丙醇和无水乙醇。

由于血液样品的种属、类别及抗凝剂的特殊性，基因组DNA的A260/A230比值可能会较低，但不影响后续PCR扩增、酶切、基因分型等应用。

磁珠在静置后会发生沉降，使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。

请使用推荐的样品量。如果样品量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响抽提获得的DNA纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善抽提效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少样品用量。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。

本试剂盒需使用56ºC水浴，请提前作好准备。50-56ºC水浴均可以使用。

除特别说明外，本产品说明书中每次Vortex应控制在5-10秒左右。

如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备DNase free的RNase A，推荐订购碧云天的RNase A (ST576/ST577)。

洗涤液中含有一定浓度的醇类，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.样品的准备。
取全血样品100µl，或有核红细胞抗凝血样品10µl，置于1.5ml离心管底部。
注1：全血的用量一般为50-200µl，如果样品量发生变化，后续裂解液、乙醇等用量也要相应发生变化。
注2：冷冻样品待完全解冻后再进行提取，但新鲜血液样品的得率和片段大小更佳。
2.加入100µl PBS (C0221A)，使血液总体积为200µl。
注：血液样本体积不足200µl时，用PBS补足至200µl即可。
3.清除RNA (可选做)。如果希望获得不含RNA的高纯度基因组DNA，加入4µl 100mg/ml DNase free的RNase A (ST5779)，Vortex混匀。室温(15-25ºC)放置2分钟。
注：在不做清除RNA的操作步骤的情况下，会导致最后获得的总DNA含有小部分RNA。如果残余的少量RNA对后续实验没有干扰，可以不进行本步实验操作，直接进入步骤4。
4.加入20µl蛋白酶K，Vortex混匀。
5.加入200µl裂解液，Vortex混匀。65ºC孵育10分钟，期间每2-3分钟Vortex 1次。
加入裂解液后必须立即Vortex混匀。不可把蛋白酶K直接和裂解液混合。
6.加入300µl异丙醇，Vortex混匀。
加入异丙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果。加入异丙醇后可能会产生沉淀，属正常现象。
7.向步骤6中的混合物加入20µl BeyoMag™磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置10分钟，每3-5分钟Vortex 1次。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
8.加入600µl洗涤液，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
9.加入600µl无水乙醇，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。重复本操作一次。
10.将离心管室温放置3-10分钟，或置于37ºC鼓风烘箱3-5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发即可。
11.加入50-100µl洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，60ºC孵育10分钟，其间Vortex离心管1-2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20ºC保存。所得溶液即为纯化的总DNA。
如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20µl，但洗脱下来的DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-40%的DNA。
参考文献：
1.Yuan QB, Huang YM, Wu WB, Zuo P, Hu N, et al. Environ Int. 2019. 131:104986.
2.Witt S, Neumann J, Zierdt H, Gébel G, Röscheisen C. Forensic Sci Int Genet. 2012. 6(5):539-47.
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