碧云天的BeyoMag™磁珠法Cell-free DNA抽提试剂盒(Cell-free DNA Isolation Kit with Magnetic Beads)，也称游离DNA抽提试剂盒、血液游离DNA抽提试剂盒或血清游离DNA抽提试剂盒，是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，用于稳定、高效、便捷地分离血清和血浆样品中游离于细胞外的DNA (Cell-free DNA, cfDNA)的试剂盒。

游离于细胞外的DNA (Cell-free DNA)，简称游离DNA，又称游离循环DNA (Circulating cell-free DNA)，是指循环血液中游离于细胞外的DNA，是机体内源性降解产生的DNA。Cell-free DNA片段通常小于1000bp，浓度个体差别较大，通常在1-100ng/ml，Cell-free DNA被发现与某些疾病如癌症等关系密切，对疾病的早期诊断、预后、检测具有重要价值[1-2]。

本试剂盒抽提所得的游离DNA可直接用于PCR、qPCR、NGS、DNA甲基化定量检测等实验。

本试剂盒的原理和主要操作过程如图1所示。血清或血浆样品在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解，释放出来的Cell-free DNA在特定条件下与磁珠特异性结合，在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，再经洗涤充分去除杂质，最后用洗脱液将Cell-free DNA从磁珠上洗脱下来。

图1.BeyoMag™ 磁珠法Cell-free DNA抽提试剂盒(D0085)抽提原理示意图。

本试剂盒具有抽提效果稳定、纯度高、操作灵活便捷等优点。本试剂盒的游离DNA抽提体系经过反复测试和优化，能回收低至1ng/ml DNA片段。样品裂解仅需10分钟，裂解完成后抽提的时间仅约25-30分钟，比很多同类产品具有明显的优势。本试剂盒回收170bp的DNA片段和抽提冻存小鼠血清的cell-free DNA的效果参考图2。

图2.碧云天BeyoMag™ 磁珠法Cell-free DNA抽提试剂盒(D0085)用于从胎牛血清中回收170bp DNA片段和小鼠血清中抽提Cell-free DNA的效果图。图A为将170bp的DNA加入到胎牛血清中，浓度分别为1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml，然后使用本试剂盒抽提Cell-free DNA，并使用BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, Low ROX) (D7262)进行qPCR定量检测回收效率。图B为本试剂盒及国外同类产品(Competitor C)抽提小鼠血清Cell-free DNA的效果，然后使用BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, Low ROX) (D7262)和三组内参引物(Actin、B2M和GAPDH)进行qPCR检测，图中可见使用本试剂盒及国外同类产品(Competitor C)抽提的Cell-free DNA，qPCR检测的Ct值基本一致。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒使用安全和便捷。目前游离DNA抽提的方法主要为酚氯仿法、柱纯化法和磁珠法。传统的酚氯仿法不仅涉及有毒有刺激的有机溶剂，而且抽提时间长、操作繁琐。柱纯化法通常需要反复离心，或者需要特殊的抽滤装置。而磁珠法条件温和，整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作，而以简单的磁铁吸附代替，确保了操作的快速和便捷。

本试剂盒适用于新鲜或冻存的血清或血浆Cell-free DNA的抽提，最低适用于20µl血清/血浆样品的抽提。样品可为新鲜制备或冻存的血清或血浆，对于-80ºC保存的样品须避免多次反复冻融。

本试剂盒小包装可用于50次Cell-free DNA抽提，中包装可用于200次Cell-free DNA抽提。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0085S-1	BeyoMag™磁珠	1ml
D0085S-2	裂解液	10ml
D0085S-3	洗涤液I (第一次使用前加入7ml无水乙醇)	21ml (+7ml)
D0085S-4	洗涤液II (第一次使用前加入24ml无水乙醇)	16ml (+24ml)
D0085S-5	洗脱液	5ml
D0085S-6	蛋白酶K	0.5ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D0085M-1	BeyoMag™磁珠	4ml
D0085M-2	裂解液	40ml
D0085M-3	洗涤液I (第一次使用前加入27ml无水乙醇)	81ml (+27ml)
D0085M-4	洗涤液II (第一次使用前加入90ml无水乙醇)	60ml (+90ml)
D0085M-5	洗脱液	20ml
D0085M-6	蛋白酶K	2ml
—	说明书	1份

保存条件：

蛋白酶K -20ºC保存，其余均室温保存，一年有效。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时，可以4ºC保存，4ºC可以保存更长时间。蛋白酶K在室温(15-25ºC)存放一周，活力无明显下降。

注意事项：

第一次使用前洗涤液I和洗涤液II需按照说明书和标签上的指示添加无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。

需自备无水乙醇和磁分离装置，推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004、FMS008、FMS009、FMS012、FMS016、FMS017、FMS024、FMS025)。

温度较低时样品裂解液中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55ºC水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。

磁珠在静置后会发生沉降，使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。

本产品适用于手工抽提，也可用于工作站或核酸自动提取仪。

裂解液对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.取血清或血浆样品20-200µl，加入200µl裂解液，10µl蛋白酶K，Vortex混匀或震荡，56ºC孵育裂解10分钟。
2.冷却至室温，每管加入200µl无水乙醇，再加入20µl BeyoMag™磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置5分钟，其间轻柔颠倒1-2次。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
注1：加入乙醇后可能会有白色絮状物出现，此为正常现象。
注2：磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
3.加入500µl洗涤液I，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
注：如果离心管内盖有磁珠，可按住离心管整体上下颠倒2次，使磁珠被完全吸附，然后弃去上清。
4.加入600µl洗涤液II， 轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
5.将离心管室温放置5-10分钟，或置于37ºC鼓风烘箱5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
6.加入35-50μl洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3-5分钟，其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20ºC保存。所得溶液即为高纯度cell-free DNA。
注：如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20µl，但洗脱下来的DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-40%的DNA。
参考文献：
1.Ranucci R. Methods Mol Biol. 2019.1909:3-12.
2.Lo YMD, Han DSC, Jiang P, Chiu RWK. Science. 2021. 372(6538):eaaw3616.
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