碧云天生产的柱式PAGE胶DNA回收试剂盒(DNA PAGE Gel Extraction Kit with Spin Column, or DNA Polyacrylamide Gel Extraction Kit with Spin Column)，是一种基于离心式纯化柱法从PAGE胶中快速、便捷、稳定、高效、高质量地回收DNA片段的试剂盒。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)常用于小于1kb的DNA片段的分析和分离纯化。PAGE胶DNA电泳的最高分辨率可达1bp，因而广泛应用于寡核苷酸分离纯化，特别是引物的分离纯化，又称PAGE纯化。PAGE纯化也常用于高通量测序时PCR扩增产物的纯化。

本试剂盒可用于20~500bp的双链DNA (dsDNA)或20-500nt单链DNA (ssDNA)从变性或非变性PAGE胶中的回收和纯化。DNA片段大小会对回收效率产生影响，片段过大或过小，回收效率都会有所降低，DNA片段大小为40-100bp时，回收效率可达70%左右。

本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，通常12个样品只需约20分钟即可完成。

本试剂盒纯化所得DNA可直接用于酶切、连接、PCR扩增、测序，PCR，杂交等后续实验。

本试剂盒回收DNA的操作流程如图1所示。含有目标DNA的PAGE胶经研磨、水浴浸泡渗透至扩散液、高速离心取上清、加入结合液吸附至纯化柱、两次洗涤、洗脱液洗脱等一系列步骤，最终得到高纯度的DNA片段回收产物。

图1. 柱式PAGE胶DNA回收试剂盒(D0058S)操作流程示意图。

本试剂盒的一个包装可用于50个DNA样品的PAGE胶回收和纯化。

包装清单： 保存条件：

室温保存，一年有效。

注意事项：

如果希望获得更高的回收效率，尽可能多地切除不含目标DNA的PAGE胶。

用研磨杵尽可能地把胶条磨碎，以促进后续DNA扩散、渗透至溶液中，最终提高回收效率。

试剂盒中的研磨杵需要重复使用。首次使用后，推荐清洗后使用RNase and DNase Away处理以确保去除核酸酶，然后再用蒸馏水冲洗后备用。如果希望一次性使用研磨杵，可以向碧云天订购TissueMaster™一次性塑料研磨杵(E6606)。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

废液收集管在一次回收中需多次使用，切勿中途丢弃。

扩散液、结合液和洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. DNA变性/非变性PAGE电泳与切胶。
a. 根据所需分离纯化的DNA片段大小配制相应浓度PAGE胶，以达到最佳的有效分离效果，相关参数如下表所示。

PAGE (%)	Size (bp)	Xylene Cyanol FF	Bromophenol blue
3.5	100-2000	460	100
5.0	80-500	260	65
8.0	60-400	160	45
12.0	40-200	70	20
15.0	25-150	60	15
20.0	6-100	45	12

b. 在DNA样品中按比例加入DNA上样缓冲液，混匀后上样。
注意：变性PAGE凝胶上样前请反复吹打上样孔，将沉淀的尿素吹出上样孔，以获得更好的电泳效果。
c. 接通电源，电泳至所需位置。
d. 取出PAGE胶，放置到含有NA-Red (D0128/D0130)等核酸染料的无DNA酶的水中，在侧摆摇床上缓慢摇动5-10分钟。
e. 使用一次性手术刀片将含目的DNA片段的PAGE胶切下，请确保切下的PAGE胶尽可能小并免受其它DNA片段的污染。
2. 凝胶研磨。
用本试剂盒提供的研磨杵在离心管内把PAGE胶研磨至细粉末状。
3. DNA扩散。
a. 加入300µl溶液I至PAGE胶粉末中，适当混匀。
b. 55℃水浴60-90min，以促进胶中DNA扩散到溶液中。
说明：对于较大片段的目的DNA来说，可适当延长扩散时间，甚至37℃过夜，以提高回收效率。孵育过程中可以适当混匀几次，促进DNA的扩散。如果能使用带有震荡或摇动功能的恒温孵育装置效果更佳。
c. 13,000g离心5分钟。
d. 小心吸取上清到新的离心管中，尽量避免吸取到凝胶。
e. 再次加入300µl溶液I至凝胶粉末中，55℃水浴30-60min，适当混匀。
说明：累计两次的扩散时间通常约2小时或以上就能获得较好的回收效果。扩散更长时间仅对长度明显偏长的DNA片段的回收效率提高有帮助。
f. 13,000g离心5分钟。将上清液再次转移至步骤3d相同的上清液收集管中。
4. 纯化柱吸附。
a. 向上清液中加入700µl溶液II，振荡或吹打混匀，室温放置1分钟。
b. 将混合液(包括沉淀物)分两次转移至纯化柱内，每次13,000g离心30秒后倒弃收集管内液体。
注意：加入结合液后溶液总体积会超过纯化柱的容量(约700µl)，因此须分成2次过柱，即将一半的混合物(约650-700µl)加入纯化柱内后12000g离心30秒，倒弃收集管内液体，再将剩余的混合物加入纯化柱内12000g离心30秒，并倒弃收集管内液体。
5. 洗涤。
a. 加入600µl溶液III，13,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。
b. 重复步骤5a一次。
6. 洗脱。
a. 13,000g离心2分钟，充分去除残留液体。
b. 将DNA纯化柱置于本试剂盒提供的洗脱管中，加入30-50µl洗脱液，室温放置2-3分钟。
c. 最高速(约12,000-16,000g)离心30秒，所得溶液即为经PAGE纯化的DNA。
注意：洗脱液需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20µl，但洗脱下来的总DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量10-35%的DNA。
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产品编号	产品名称	包装
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