BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒
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产品编号 D0051M
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¥ 1698.00
产品包装:
50次 200次
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碧云天研发生产的BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒,即BeyoMag™ Residual DNA Sample Preparation Kit with Magnetic Beads,也称宿主细胞残留DNA提取试剂盒(Residual Host Cell DNA Preparation Kit)或残留DNA样品前处理试剂盒,是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,用于稳定、高效、便捷地从各种生物制品的中间品、半成品和成品中提取并纯化残留的大肠杆菌、酵母、昆虫或哺乳动物等宿主细胞微量DNA的试剂盒。本试剂盒制备的DNA样品可以用于相关DNA残留qPCR检测试剂盒。

本试剂盒的原理和操作流程如图1所示。样品中蛋白首先被蛋白酶K消化,释放出来的基因组DNA在特定条件下与磁珠特异性结合。在外界磁场(如磁分离架)的作用下,磁珠与相应溶液可以快速高效地分离。随后通过两次洗涤去除各种杂质,最后通过洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来[1-3]。整个过程无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,全程仅需约20分钟即可完成。

图1. BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒(D0051)抽提DNA原理示意图。

本试剂盒可搭配碧云天大肠杆菌DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7701)等残留DNA检测试剂盒用于残留检测,使用E.coli DNA Control模拟样品的回收率测试结果见下表。

回收前残留DNA浓度 回收前体积 回收后残留DNA浓度 回收后体积 回收率
30fg/μl 100μl 32.6fg/μl 100μl 109%
3fg/μl 100μl 3.08fg/μl 100μl 103%

注1:回收率和样品浓度、体积、样品种类及实验操作等的不同而存在差异,表中数据仅供参考。

注2:根据中华人民共和国药典(2020年版‧三部)“外源性DNA残留测定法”中“第三法 定量PCR”对于结果计算的要求,加标样品的回收率应在50%~150%之间。

本试剂盒在提取低至飞克(Femtogram, fg)水平的残留DNA时仍具有较高的回收率,通常无需添加糖原、酵母RNA或Poly A等Carrier RNA或Oligo dT等Carrier DNA。使用本试剂盒对100μl模拟待测样品(含BSA)以及对应的加标样品(即在待测样品基础上再添加一定量的标准品)进行样品制备操作,并使用碧云天大肠杆菌DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7701)检测样品浓度。回收率计算结果见下表。

重复 待测样品CT值 待测样品lgCT 待测样品浓度 加标样品CT值 加标样品lgCT 加标样品浓度 回收率
1 33.53 0.97 9.36fg/μl 31.6 1.54 35.0fg/μl 85.4%
2 34.30 0.74 5.53fg/μl 31.84 1.47 29.7fg/μl 80.5%
3 33.82 0.89 7.68fg/μl 31.73 1.51 32.0fg/μl 81.1%

注:上表中用于计算样品浓度的E.coli DNA标准曲线公式为:Y = -3.371X + 36.80,其中Y为CT值,X为该待测样品浓度的对数,斜率和Y轴截距是由荧光定量PCR仪自动生成。上表中用于计算加样回收率的公式为:(加标样品的浓度 - 待测样品的浓度) × 洗脱体积 / 加标量。洗脱体积为100μl,加标量为3000fg E.coli DNA。

本试剂盒小包装可以抽提50个样品的总DNA,中包装可以抽提200个样品的总DNA。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0051S-1 BeyoMag™磁珠 1ml
D0051S-2 蛋白酶K 1ml
D0051S-3 洗涤液Ⅰ (首次使用前加入7ml无水乙醇) 21ml (+7ml)
D0051S-4 洗涤液Ⅱ (首次使用前加入24ml无水乙醇) 16ml (+24ml)
D0051S-5 洗脱液 10ml
D0051S-6 Glycogen (20mg/ml, DNase free) 50μl
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D0051M-1 BeyoMag™磁珠 4ml
D0051M-2 蛋白酶K 4ml
D0051M-3 洗涤液Ⅰ (首次使用前加入28ml无水乙醇) 84ml (+28ml)
D0051M-4 洗涤液Ⅱ (首次使用前加入96ml无水乙醇) 64ml (+96ml)
D0051M-5 洗脱液 40ml
D0051M-6 Glycogen (20mg/ml, DNase free) 200μl
- 说明书 1份
保存条件:

蛋白酶K和Glycogen -20ºC保存,其余均室温保存,一年有效。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时,可以4ºC保存,4ºC可以保存更长时间。蛋白酶K和Glycogen室温(15-25ºC)存放,至少一周有效。

注意事项:

需自备磁分离装置,推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004/FMS008/FMS012/FMS016/FMS024)。

首次使用前洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ需按照说明书和标签上的指示添加无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。

磁珠在静置后会发生沉降,使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象,可以在磁珠聚集后晃动管内液体,使挂壁的磁珠流下。

请使用推荐的样品量。如果样品量过大,可能造成磁珠聚集,会影响洗涤进而影响抽提获得的DNA纯度。发生磁珠聚集时,洗涤时需尽量分散磁珠,这样可有效改善抽提效果。如果发生磁珠聚集现象,建议在后续实验中适当减少样品用量。

本试剂盒的某些步骤需使用55ºC水浴,请提前作好准备。

除特别说明外,每次Vortex应控制在5-10秒左右。

本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。

建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系,这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 需要用户自备的耗材、仪器和试剂:
a. 磁分离装置、水浴锅、涡旋振荡器。
b. DNase-free、RNase-free的吸头(推荐低吸附吸头,如FTIP616)、离心管(推荐低吸附1.5毫升离心管,如FTUB312),无水乙醇、PBS。
2. 样品准备:
a. 如果样品为中间品或半成品,宿主细胞DNA残留较多,为了保证检测的准确性,使检测值在标准曲线线性范围之内,需要用PBS进行适当比例稀释后再纯化提取。
b. 如果样品为干粉形式,可用超纯水将样本稀释成1-100mg/ml后使用。
3. 样品DNA提取:
a. 收集100μl样品于1.5ml离心管中,加入100µl PBS (C0221A) 并混匀。
注1:如果预计残留量非常少并且没有低吸附的吸头、离心管,建议在每个样品中添加1µl Glycogen (20mg/ml, DNase free)以提高提取效率、减少核酸吸附损耗;也可进一步添加Yeast RNA (DNase, RNase &Proteinase Free) (R0040)或Carrier RNA (Poly A) (R0037),具体用量参见相关产品说明书。
注2:建议每个样品进行平行的三次DNA提取处理。
b. 加入20µl蛋白酶K,混匀。55ºC孵育30分钟。注:若样品中蛋白浓度>50mg/ml,建议增加蛋白酶K的用量至40µl,或者延长孵育时间至60分钟。
c. 加入200µl无水乙醇,Vortex混匀。
加入乙醇后必须充分混匀,否则会严重影响抽提效果。加入乙醇后可能会产生白色沉淀,属正常现象,后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部用于和磁珠的结合,沉淀不会影响抽提效果。
d. 向步骤c中的混合物加入20µl BeyoMag™磁珠悬液(使用前务必混匀),轻柔混匀后,室温放置5-10分钟(每隔3分钟涡旋混匀10秒)。将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸除残液。
磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要,可适当增加磁珠用量,延长结合时间以提高得率。
e. 加入500µl洗涤液Ⅰ,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
f. 加入600µl洗涤液Ⅱ,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
g. 将离心管室温放置5-10分钟,或置于37ºC鼓风烘箱5分钟,确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
h. 加入50-100μl洗脱液,轻柔震荡使磁珠悬于溶液中,室温孵育3-5分钟,其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸取溶液至新离心管中,置于-20ºC保存。所得溶液即为纯化的总DNA。
参考文献:
1. Vogelstein B, Gillespie D. Proc Natl Acad Sci U S A. 1979. 76(2):615-9.
2. Boom R, Sol CJ, Salimans MM, Jansen CL, Wertheim-van Dillen PM, et al. J Clin Microbiol. 1990. 28(3):495-503.
3. Archer MJ, Lin B, Wang Z, Stenger DA. Anal Biochem. 2006. 355(2):285-97.
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D0816-10ml Glycogen (DNase, RNase & Protease free) 10ml
R0037-1mg Carrier RNA (Poly A) 1mg
R0037-5mg Carrier RNA (Poly A) 5×1mg
R0037-25mg Carrier RNA (Poly A) 25mg
R0037-100mg Carrier RNA (Poly A) 100mg
R0037-500mg Carrier RNA (Poly A) 500mg
R0040-0.5ml Yeast RNA (DNase, RNase &Proteinase Free) 0.5ml
R0040-2ml Yeast RNA (DNase, RNase &Proteinase Free) 2ml
R0040-10ml Yeast RNA (DNase, RNase &Proteinase Free) 10ml
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