碧云天研发生产的BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒，即BeyoMag™ Residual DNA Sample Preparation Kit with Magnetic Beads，也称宿主细胞残留DNA提取试剂盒(Residual Host Cell DNA Preparation Kit)或残留DNA样品前处理试剂盒，是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，用于稳定、高效、便捷地从各种生物制品的中间品、半成品和成品中提取并纯化残留的大肠杆菌、酵母、昆虫或哺乳动物等宿主细胞微量DNA的试剂盒。本试剂盒制备的DNA样品可以用于相关DNA残留qPCR检测试剂盒。

本试剂盒的原理和操作流程如图1所示。样品中蛋白首先被蛋白酶K消化，释放出来的基因组DNA在特定条件下与磁珠特异性结合。在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以快速高效地分离。随后通过两次洗涤去除各种杂质，最后通过洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来[1-3]。整个过程无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，全程仅需约20分钟即可完成。

图1. BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒(D0051)抽提DNA原理示意图。

本试剂盒可搭配碧云天大肠杆菌DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7701)等残留DNA检测试剂盒用于残留检测，使用E.coli DNA Control模拟样品的回收率测试结果见下表。

回收前残留DNA浓度	回收前体积	回收后残留DNA浓度	回收后体积	回收率
30fg/μl	100μl	32.6fg/μl	100μl	109%
3fg/μl	100μl	3.08fg/μl	100μl	103%

注1：回收率和样品浓度、体积、样品种类及实验操作等的不同而存在差异，表中数据仅供参考。

注2：根据中华人民共和国药典(2020年版‧三部)“外源性DNA残留测定法”中“第三法 定量PCR”对于结果计算的要求，加标样品的回收率应在50%~150%之间。

本试剂盒在提取低至飞克(Femtogram, fg)水平的残留DNA时仍具有较高的回收率，通常无需添加糖原、酵母RNA或Poly A等Carrier RNA或Oligo dT等Carrier DNA。使用本试剂盒对100μl模拟待测样品(含BSA)以及对应的加标样品(即在待测样品基础上再添加一定量的标准品)进行样品制备操作，并使用碧云天大肠杆菌DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7701)检测样品浓度。回收率计算结果见下表。

重复	待测样品CT值	待测样品lgCT	待测样品浓度	加标样品CT值	加标样品lgCT	加标样品浓度	回收率
1	33.53	0.97	9.36fg/μl	31.6	1.54	35.0fg/μl	85.4%
2	34.30	0.74	5.53fg/μl	31.84	1.47	29.7fg/μl	80.5%
3	33.82	0.89	7.68fg/μl	31.73	1.51	32.0fg/μl	81.1%

注：上表中用于计算样品浓度的E.coli DNA标准曲线公式为：Y = -3.371X + 36.80，其中Y为CT值，X为该待测样品浓度的对数，斜率和Y轴截距是由荧光定量PCR仪自动生成。上表中用于计算加样回收率的公式为：(加标样品的浓度 - 待测样品的浓度) × 洗脱体积 / 加标量。洗脱体积为100μl，加标量为3000fg E.coli DNA。

本试剂盒小包装可以抽提50个样品的总DNA，中包装可以抽提200个样品的总DNA。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0051S-1	BeyoMag™磁珠	1ml
D0051S-2	蛋白酶K	1ml
D0051S-3	洗涤液Ⅰ (首次使用前加入7ml无水乙醇)	21ml (+7ml)
D0051S-4	洗涤液Ⅱ (首次使用前加入24ml无水乙醇)	16ml (+24ml)
D0051S-5	洗脱液	10ml
D0051S-6	Glycogen (20mg/ml, DNase free)	50μl
-	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D0051M-1	BeyoMag™磁珠	4ml
D0051M-2	蛋白酶K	4ml
D0051M-3	洗涤液Ⅰ (首次使用前加入28ml无水乙醇)	84ml (+28ml)
D0051M-4	洗涤液Ⅱ (首次使用前加入96ml无水乙醇)	64ml (+96ml)
D0051M-5	洗脱液	40ml
D0051M-6	Glycogen (20mg/ml, DNase free)	200μl
-	说明书	1份

保存条件：

蛋白酶K和Glycogen -20ºC保存，其余均室温保存，一年有效。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时，可以4ºC保存，4ºC可以保存更长时间。蛋白酶K和Glycogen室温(15-25ºC)存放，至少一周有效。

注意事项：

需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004/FMS008/FMS012/FMS016/FMS024)。

首次使用前洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ需按照说明书和标签上的指示添加无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。

磁珠在静置后会发生沉降，使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。

请使用推荐的样品量。如果样品量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响抽提获得的DNA纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善抽提效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少样品用量。

本试剂盒的某些步骤需使用55ºC水浴，请提前作好准备。

除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。

建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 需要用户自备的耗材、仪器和试剂：
a. 磁分离装置、水浴锅、涡旋振荡器。
b. DNase-free、RNase-free的吸头(推荐低吸附吸头，如FTIP616)、离心管(推荐低吸附1.5毫升离心管，如FTUB312)，无水乙醇、PBS。
2. 样品准备：
a. 如果样品为中间品或半成品，宿主细胞DNA残留较多，为了保证检测的准确性，使检测值在标准曲线线性范围之内，需要用PBS进行适当比例稀释后再纯化提取。
b. 如果样品为干粉形式，可用超纯水将样本稀释成1-100mg/ml后使用。
3. 样品DNA提取：
a. 收集100μl样品于1.5ml离心管中，加入100µl PBS (C0221A) 并混匀。
注1：如果预计残留量非常少并且没有低吸附的吸头、离心管，建议在每个样品中添加1µl Glycogen (20mg/ml, DNase free)以提高提取效率、减少核酸吸附损耗；也可进一步添加Yeast RNA (DNase, RNase &Proteinase Free) (R0040)或Carrier RNA (Poly A) (R0037)，具体用量参见相关产品说明书。
注2：建议每个样品进行平行的三次DNA提取处理。
b. 加入20µl蛋白酶K，混匀。55ºC孵育30分钟。注：若样品中蛋白浓度＞50mg/ml，建议增加蛋白酶K的用量至40µl，或者延长孵育时间至60分钟。
c. 加入200µl无水乙醇，Vortex混匀。
加入乙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果。加入乙醇后可能会产生白色沉淀，属正常现象，后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部用于和磁珠的结合，沉淀不会影响抽提效果。
d. 向步骤c中的混合物加入20µl BeyoMag™磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置5-10分钟(每隔3分钟涡旋混匀10秒)。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
e. 加入500µl洗涤液Ⅰ，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
f. 加入600µl洗涤液Ⅱ，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
g. 将离心管室温放置5-10分钟，或置于37ºC鼓风烘箱5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
h. 加入50-100μl洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3-5分钟，其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20ºC保存。所得溶液即为纯化的总DNA。
参考文献：
1. Vogelstein B, Gillespie D. Proc Natl Acad Sci U S A. 1979. 76(2):615-9.
2. Boom R, Sol CJ, Salimans MM, Jansen CL, Wertheim-van Dillen PM, et al. J Clin Microbiol. 1990. 28(3):495-503.
3. Archer MJ, Lin B, Wang Z, Stenger DA. Anal Biochem. 2006. 355(2):285-97.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
C0221A	PBS	500ml
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R0037-1mg	Carrier RNA (Poly A)	1mg
R0037-5mg	Carrier RNA (Poly A)	5×1mg
R0037-25mg	Carrier RNA (Poly A)	25mg
R0037-100mg	Carrier RNA (Poly A)	100mg
R0037-500mg	Carrier RNA (Poly A)	500mg
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FTIP616	BeyoGold™无菌盒装低吸附吸头(0.1-10μl, 无色)	96个/盒，50盒/箱
FTIP631-10bxs	BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(0.5-10μl, 无色加长, 4.5cm)	96个/盒, 10盒/箱
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