BeyoMag™ DNA长度分选磁珠
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产品编号 D0038-20ml
数量
¥ 1058.00
产品包装:
1ml 5ml 20ml 100ml
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碧云天研发生产的BeyoMag™ DNA长度分选磁珠(BeyoMag™ DNA Size Selection Magnetic Beads)是基于固相载体可逆化固定(Solid Phase Reverse Immobilization, SPRI)技术,使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,配合优化的缓冲体系,在特定比例的磁珠悬液中分离纯化出特定长度范围核酸片段的产品。本产品适合用于回收、分离或纯化大于100bp的特定长度范围内的DNA或RNA片段,特别适合用于高通量测序文库构建时DNA或RNA的长度分选。

通过调整本产品的用量以及通过单侧或双侧(一次或两次)分离纯化,可以实现不同长度范围DNA的分离纯化。

核酸纯化和杂质的去除对于基因组相关实验的进行是非常重要的,包括测序、qPCR/ddPCR/PCR、微阵列(Microarray)和其它酶促反应等[1]。本产品广泛应用于基因测序以及分子诊断等领域,尤其适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)文库构建过程中的DNA或RNA长度分选、纯化。本产品兼容常规的建库试剂盒,使用方法、片段回收率和大小分布与目前广泛使用的Agencourt AMPure XP Beads (Beckman Coulter公司产品)高度一致。DNA长度分选磁珠,也被称为DNA长度分选纯化磁珠、DNA片段分选磁珠、DNA分选磁珠、DNA筛选磁珠、DNA Clean Beads、NGS Clean-up and Size Select、DNA Selection Beads、DNA Select Isolation Kit、Sample Purification Beads等。

本产品的具体工作原理如下。产品体系为含磁珠和聚乙二醇(PEG)等物质的盐溶液。在一定浓度的盐溶液与PEG环境下,DNA分子构象会发生变化,暴露出大量的磷酸基团,与羧基(-COOH)包被的磁珠结合。随后通过磁性分离,当PEG和盐被去除后, DNA就可以从磁珠上被洗脱,得到经过分离纯化的DNA。实验过程中通过控制缓冲液中PEG和盐的浓度,可以将不同大小的DNA片段结合到磁珠上并进行纯化[1-2]。本产品进行DNA长度分选的实验流程参考图1。

图1. 碧云天的BeyoMag™ DNA长度分选磁珠的实验流程示意图。

本产品特异性强、DNA结合量高。本产品DNA结合速度快、结合量高,不同大小的核酸片段可以快速进行分离纯化。而且磁珠粒径小,不易产生非特异吸附,可以快速有效去除未掺入的dNTP、引物、引物二聚体、盐和其它污染物。

本产品兼容性强。本产品不仅适用于少量样本的手工操作,也适用于高通量的自动化操作系统。

本产品分选长度范围便捷、效率高。本产品可通过调整磁珠用量从而调整分选DNA长度的范围以适应不同实验的需求。不同批次之间结果具有一致性。分选片段范围与实验预设一致,实验结果可预测。

本产品操作简单。本产品采用磁性分离,无需离心,有助于保留核酸的完整性,DNA片段纯化回收率高。

本产品安全环保。与传统的DNA回收方法相比,避免了酚、氯仿等有机溶剂的使用,更加安全。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0038-1ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 1ml
D0038-5ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 5ml
D0038-20ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 20ml
D0038-100ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 100ml
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,一年有效。

注意事项:

尽管本产品在使用方法、片段回收率等方面与其他公司同类产品相似,但仍建议进行一定的测试和优化。

本产品避免冷冻、避免高速离心。

为保证DNA的回收率,使用前须将磁珠由4℃冰箱取出,或取所需量,使其温度平衡至室温后再使用。

分装或使用磁珠时,请适当漩涡震荡或充分颠倒以保证磁珠充分混匀。

80% (v/v)乙醇溶液推荐现用现配,否则后续使用时可能会因为乙醇的挥发而影响回收效率。

DNA样品初始体积须大于100μl,不足时请用超纯水补齐至100μl。因为样品体积过小,将导致磁珠与样品孵育不均、移液误差增大,进而影响分选的准确性。

请勿长时间干燥磁珠,干燥过度将导致磁珠不可逆的聚集,从而降低洗脱效率。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.准备工作:
a.将磁珠溶液从4℃冰箱取出,适当漩涡震荡或充分颠倒以保证磁珠充分混匀,然后取出所需的量,使其平衡至室温。
b.新鲜配制80% (v/v)乙醇溶液。例如分别量取8ml无水乙醇和2ml超纯水或双蒸水,混匀后即得约10ml 80% (v/v)乙醇溶液。
注:因为乙醇和水混合后体积会发生改变,所以请勿量取8ml乙醇,加超纯水或双蒸水定容至10ml。
2.DNA单侧长度分选(Single-sided size selection)。
单侧长度分选法主要用于去除短片段DNA,特别是100bp或200bp以下的DNA片段,如引物或接头二聚体等,以及去除酶、dNTP和盐溶液等。一般来说,磁珠用量体积比越高,短片段DNA与磁珠的结合率越高,因此可以通过调整磁珠用量,可以去除不同长度范围的短片段DNA。
Size-selection of DNA Bead Volumes
≥1000bp 0.5X
≥300bp 1.0X
≥200bp 1.2-1.5X
≥100bp 2.0-3.0X
注1:此磁珠用量为参考用量,也可参考已使用的方法并根据实际测试结果进行适当的调整。表中“X”表示DNA样品体积。
例如:DNA样品体积为100μl,如果需要纯化≥1000bp的DNA片段,则磁珠用量为0.5X = 0.5×100μl = 50μl。
注2:此处的长度范围是指大部分DNA片段范围,仍然可能含有少量低于该长度的短片段。
a.轻柔涡旋震荡或上下颠倒以保证磁珠充分混匀,参考上表在DNA样品溶液中加入相应体积磁珠。
b.轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀,室温孵育5min。
c.将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5min,待溶液澄清后,小心移除上清。
d.保持离心管始终处于磁力架中,加入200μl新鲜配制的80% (v/v)乙醇溶液漂洗磁珠,室温孵育30秒,小心移除上清。
e.重复步骤d一次。
f.保持离心管始终处于磁力架中,打开离心管盖,室温干燥至磁珠刚刚出现龟裂(约5-10min)。
g.将离心管从磁力架中取出,加入适量超纯水或双蒸水(≥20μl),漩涡振荡或使用移液器轻轻吹打以充分混匀。
h.室温孵育5min。
i.将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5min,待溶液澄清后,小心吸取上清至洁净的离心管中,即完成DNA片段的纯化。使用本产品进行DNA片段的纯化效果参考图2。
图2. 碧云天的BeyoMag™ DNA长度分选磁珠用于DNA片段纯化(单侧长度分选法)的效果图。100μl的样品(含总量为2μg的DNA,大小为100-10,000bp),分别加入0.5X-3X体积的分选磁珠,进行DNA片段纯化。20μl纯化产物加入4μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
3.DNA双侧长度分选(Double-sided size selection)。
二代测序的DNA文库一般要求长度在300-500bp之间,所以需要去除大片段DNA和非常小的DNA片段,此时可以通过双侧长度分选(双轮分选法)对DNA片段进行分选。通常第一轮分选的目的是去除大片段DNA,所以也被称为右侧清除(Right-side clean-up);第二轮分选的目的是去除小片段DNA,所以也被称为左侧清除(Left-side clean-up)。通过两轮分选,可以把DNA片段控制在适当的长度范围内。下表为DNA长度分选的参考条件。
Size-selection of DNA 200-300bp 300-400bp 400-500bp 500-600bp 600-1000bp
Bead Volumes for Round 1 0.85X 0.7X 0.65X 0.58X 0.5X
Bead Volumes for Round 2 (0.15~0.3)Y (0.05~0.2)Y
注:此磁珠用量为参考用量,推荐参考已使用的方法并根据实际测试结果进行适当的调整,特别是第二轮的磁珠用量。表中“X”表示DNA样品体积,“Y”表示DNA样品体积和第一轮磁珠用量之和。例如:DNA样品体积为100μl,如果需要分选200-300bp的DNA片段,则第一轮磁珠用量为0.85X = 0.85×100μl = 85μl,第二轮磁珠用量V2为(0.15~0.3)×(100μl+85μl) = 27.75~55.5μl;
a.轻柔涡旋震荡或上下颠倒以保证磁珠充分混匀,参考上表在DNA样品溶液中加入第一轮磁珠用量(Bead Volumes for Round 1)。
b.轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀,室温孵育5min。
c.将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5min,待溶液澄清后,小心转移上清到新的离心管中。
注:转移上清时,切勿将上清全部吸出,请残留2μl于管底,避免吸到磁珠从而影响DNA长度分选效果。
d.参考上表向上清中加入第二轮磁珠用量(Bead Volumes for Round 2)。
e.轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀,室温孵育5min。
f.将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5min,待溶液澄清后,小心移除上清。
g.保持离心管始终处于磁力架中,加入200μl新鲜配制的80% (v/v)乙醇溶液漂洗磁珠,室温孵育30秒,小心移除上清。
h.重复步骤g一次。
i.保持离心管始终处于磁力架中,打开离心管盖,室温干燥至磁珠刚刚出现龟裂(约5-10min)。
j.将离心管从磁力架中取出,加入适量超纯水或双蒸水(≥20μl),轻柔涡旋震荡或使用移液器轻轻吹打以充分混匀。
k.室温孵育5min。
l.将离心管短暂离心后置于磁力架中分离5min,待溶液澄清后,小心吸取上清至洁净的离心管中,即完成双侧法DNA长度分选。可取少量分选后的样品电泳检测DNA片段长度,然后-20℃保存。使用本产品进行DNA长度分选的效果参考图3。
图3. 碧云天的BeyoMag™ DNA长度分选磁珠用于DNA长度分选(双侧分选法)的效果图。100μl的样品(含总量为1μg的DNA,大小为100-10,000bp),按照上表加入分选磁珠,进行双侧法DNA长度分选。20μl分选产物加入4μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
参考文献:
1. Ivo Nikolaev Sirakov. From Basic Aspects to Laboratory Tools, IntechOpen. 2016. Chapter 1.
2. Hawkins T L, O'Connor-Morin T, Roy A, Santillan C. Nucleic Acids Res. 1994. 22(21):4543-4.
3. Quail M A, Gu Y, Swerdlow H, Mayho M. Electrophoresis. 2012. 33(23):3521-3528.
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产品编号 产品名称 包装
D0038-1ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 1ml
D0038-5ml BeyoMag™ DNA长度分选磁珠 5ml
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D7103S BeyoNGS™ Fast DNA Library Preparation Kit (For Illumina) 20次
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