碧云天研发生产的BeyoExo™外泌体专用裂解液(BeyoExo™ Lysis Buffer for Exosome)，是一种针对外泌体样品研发的专用裂解液。经本产品裂解得到的外泌体蛋白样品可用于Western、BCA法检测蛋白浓度等。

外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直径约为40-160nm，具有脂质双分子层结构，天然存在于血液、尿液、脑脊液，以及体外培养细胞的上清液中[1]，几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。

外泌体标志蛋白(Protein biomarkers for exosome)，也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome)，可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体数据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质，ExoCarta列出了100种常见外泌体蛋白标志物(http://exocarta.org/exosome_markers_new)，其中Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)、Hsp70、CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin和Ceramide是最常用的外泌体蛋白标志物(如图1所示) [3]。

图1. 常见的外泌体蛋白标志物示意图。

BeyoExo™外泌体专用裂解液含Tris (pH7.4)，NaCl，Triton X-100，Sodium deoxycholate，SDS，EDTA，Protease如AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E64、Leupeptin等成分，不仅可以充分溶解常见的外泌体膜蛋白，也可以有效抑制蛋白降解。

用BeyoExo™外泌体专用裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用常规的Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

本裂解液裂解后的样品，进一步添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液后进行Western的效果图参见图2。

图2. 碧云天BeyoExo™外泌体专用裂解液(C3632)裂解的外泌体通过Western检测TSG101、Hsp70和CD9的效果图。对于外泌体样品，其中TSG101 (对应的抗体为AF0608)、Hsp70 (对应的抗体为AF0601)的Western检测是添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015)后进行，CD9 (对应的抗体为AF0611)的Western检测是添加变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X) (P0016P)后进行。实际效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C3632-20ml	BeyoExo™外泌体专用裂解液	20ml
C3632-100ml	BeyoExo™外泌体专用裂解液	100ml
-	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。首次使用时建议适当分装，须避免反复冻融。

注意事项：

裂解样品的所有步骤都需在冰上或4ºC进行。

如有需要可自备PMSF。建议使用碧云天的PMSF (ST506/ST507)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 实验前请将BeyoExo™外泌体专用裂解液置于4ºC融化，冰上备用。
2. 推荐使用BeyoExo™增强型细胞上清外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3622)、细胞上清外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3620)或BeyoExo™血清血浆外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3629)进行相应样品的外泌体提取。
3. 提取的外泌体可以使用重悬液重悬后进行裂解，也可以直接使用裂解液裂解。例如，对于使用10ml的HeLa细胞上清提取外泌体，可以使用10-20μl重悬液进行重悬，然后按1:2的体积比例加入BeyoExo™外泌体专用裂解液进行裂解，轻轻吹打混匀，置于冰上裂解10分钟。例如每10μl重悬液加入20μl本裂解液，也可考虑在1:1-1:5范围内酌情调整用量。对于使用10ml的HeLa细胞上清提取外泌体外泌体沉淀，也可以直接加入20-40μl本裂解液，轻轻吹打混匀，置于冰上裂解10分钟。
注1：裂解后蛋白浓度通常应小于2μg/μl，以保证充分裂解。
注2：不同样品提取获得的外泌体的量会有所不同，相应的重悬液和裂解液的用量也需要适当调整。例如对于B16-F10 (小鼠黑色素瘤高转移细胞)等分泌外泌体较多的外泌体样品，可适当增加重悬液及裂解液的用量。
4. 裂解完成后，4ºC，12,000×g离心5分钟取上清，使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)测定蛋白浓度，或根据检测的外泌体标志蛋白，添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015)或变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X) (P0016P)并变性后进行Western等后续实验。通常取10-20μl上样，就能获得比较理想的外泌体标志蛋白的Western条带。
参考文献：
1. Metzelaar MJ, Wijngaard PL, Peters PJ, Sixma JJ, Nieuwenhuis HK, et al. J Biol Chem. 1991. 266(5):3239-45.
2. Luo W, Dai Y, Chen Z, Yue X, Andrade-Powell KC, et al. Commun Biol. 2020. 3(1):114.
3. Kalluri R, LeBleu VS. Science. 2020. 367(6478).
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