多能干细胞碱性磷酸酶显色试剂盒
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产品编号 C3250S
数量
¥ 268.00
产品包装:
共100ml
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多能干细胞碱性磷酸酶显色试剂盒(Pluripotent Stem Cell Alkaline Phosphatase Color Development Kit),也称多能干细胞BCIP/NBT碱性磷酸酶检测试剂盒(Pluripotent Stem Cell BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit),是一种用于多能干细胞碱性磷酸酶显色检测的试剂盒,也可以用于其它用途的碱性磷酸酶显色检测。

碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1),是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等,并在碱性条件下最为有效[1]。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记,最终用于蛋白和核酸等的检测,也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去单磷酸化),特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。

BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物。在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。

本试剂盒可以用于多能干细胞例如诱导多功能干细胞iPS、胚胎干细胞等的鉴定,也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。同时也可以用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C3250S-1 碱性磷酸酯酶显色缓冲液 100ml
C3250S-2 BCIP溶液(300X) 350μl 
C3250S-3 NBT溶液(150X) 700μl
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,一年有效。BCIP溶液和NBT溶液需避光保存。

注意事项:

BCIP对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。NBT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.对于检测干细胞等内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品,在适当固定后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。对于检测外源碱性磷酸酶的细胞样品、组织切片或膜,在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。
2.按照如下比例依次加入各溶液,混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液:
碱性磷酸酯酶显色缓冲液 3ml 10ml
BCIP溶液(300X) 10μl 33μl
NBT溶液(150X) 20μl 66μl
BCIP/NBT染色工作液 3.03ml 10.1ml
3.最后一次洗涤完毕后,去除洗涤液,加入适量BCIP/NBT染色工作液,确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
5.去除BCIP/NBT染色工作液,用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。
6.对于细胞样品或组织切片,显色反应终止后,如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色,以便于观察。对于膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。
参考文献:
1.Green MR, Sambrook J. Alkaline Phosphatase. Cold Spring Harb Protoc. 2020 Aug 3;2020(8):100768.
使用本产品的文献: