通用型病毒浓缩试剂盒
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产品编号 C2901S
数量
¥ 412.00
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碧云天生产的通用型病毒浓缩试剂盒(Universal Virus Concentration Kit),也称通用型病毒沉淀试剂盒(Universal Virus Precipitation Kit),是一种简单、快速、高效的可以用于多种常见重组病毒浓缩的试剂盒。本试剂盒可用于多种常见病毒的浓缩,无需超离心或过柱浓缩,病毒回收率最高可达约90%,浓缩后病毒浓度可提高10-100倍,并能有效(但并不充分)地去除通过细胞培养包装获得的病毒上清液中含有的大量血清蛋白、细胞碎片、基因组DNA等。

本产品适用范围广。本试剂盒可用于实验室包装的慢病毒(Lentivirus)、逆转录病毒(Retrovirus)、腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)、腺病毒(Adenovirus)和杆状病毒(Baculovirus)等病毒颗粒的浓缩,也可以用于其它适当样品中的病毒的浓缩。

本产品使用便捷。只需将病毒沉淀试剂(4X)与含病毒的上清液按照1:3的比例混合,4℃孵育一段时间后离心,弃上清后用试剂盒中的病毒重悬液重悬病毒即可。

本产品无需超速离心。无需使用超高速离心机进行长时间离心,普通冷冻离心机3500×g离心0.5-1h即可得到病毒颗粒沉淀。

本产品病毒浓缩效率高。超滤、超速离心法等病毒浓缩法,操作时间长,步骤繁琐,且通常会有细胞碎片和血清蛋白等的污染,病毒纯度低。使用本产品进行病毒浓缩后,病毒滴度可提高10-100倍,病毒回收率最高可达约90%,病毒损失少,并且病毒在浓缩过程中能保持病毒生物活性。

本产品浓缩的病毒保存效果好。本产品提供了病毒保护试剂,可以让浓缩后的病毒有更好的保存效果,保存过程中病毒滴度下降更为缓慢。

本产品的小包装、中包装和大包装分别可以用于150ml、600ml和3L病毒上清液的浓缩。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C2901S-1 病毒沉淀试剂(4X) 50ml
C2901S-2 病毒重悬液 15ml
C2901S-3 病毒保护试剂(10X) 1.5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
C2901M-1 病毒沉淀试剂(4X) 200ml
C2901M-2 病毒重悬液 60ml
C2901M-3 病毒保护试剂(10X) 6ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
C2901L-1 病毒沉淀试剂(4X) 500ml×2
C2901L-2 病毒重悬液 300ml
C2901L-3 病毒保护试剂(10X) 30ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。病毒沉淀试剂(4X) 4℃保存一年有效,病毒重悬液4℃保存半年有效。

注意事项:

病毒沉淀试剂(4X) -20℃保存后,融解会有沉淀析出,可以37℃水浴加热30分钟或以上,完全溶解后使用。

浓缩的病毒后续用于培养的细胞或组织感染时,推荐在病毒重悬液中添加病毒保护试剂;如果后续最终考虑用于动物实验,不宜在病毒重悬液中添加病毒保护试剂。

为避免病毒失活,浓缩前的病毒上清液或浓缩后的病毒都应尽量避免反复冻融。

细胞培养液中的血清对于病毒的沉淀和浓缩有一定的帮助。如果病毒包装用的细胞培养液是无血清或低血清培养液,或者需要从蛋白含量很低的溶液中浓缩病毒,建议在病毒浓缩时添加无菌的BSA至终浓度为3%,这样会显著提高浓缩效果。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.使用培养的细胞包装病毒完成后,收集含病毒的上清液。4℃,3500×g离心10min以充分沉淀细胞碎片,小心吸取上清液用于后续的浓缩。也可以取含病毒的上清液,使用0.45μm针头滤器(FF365/FF375)过滤以充分沉淀细胞碎片。
注:过滤时,须使用滤膜材质为聚醚砜(polyethersulfone, PES)的针头滤器对病毒上清液进行过滤,其它材质如硝酸纤维素(nitrocellulose, NC)膜可能对病毒有吸附。
2.取出4℃预冷的病毒沉淀试剂(4X),按照1份病毒沉淀试剂(4X)和3份病毒上清液的比例混合。充分混匀后,在混匀仪或侧摆摇床上低转速4℃混匀至少4h或过夜。4℃孵育充分后通常溶液会变浑浊。更长的孵育时间(如4℃过夜),有助于提高病毒回收率,但孵育时间不宜超过24h。
注1:病毒沉淀试剂(4X)非常粘稠,需缓慢吸取,缓慢加入,并且一定要确保病毒沉淀试剂(4X)和病毒上清液两者充分混匀,才能确保后续的得率效果。
注2:混匀仪或侧摆摇床上混匀时,需要确保相应转速下溶液能充分混匀。
注3:病毒沉淀过程中须保持4℃,如果样品体积大,如超过100ml,建议更长的孵育时间。仅在4℃时,本试剂盒能确保达到最佳的沉淀效果。温度偏高时,会导致沉淀不充分,而影响得率等。
3.4℃,3500×g离心0.5-1h。此时离心管底通常可见白色沉淀(有时沉淀不可见),小心吸除上清,切勿触及沉淀,不要剧烈晃动离心管。
4.4℃,3500×g离心1min,小心吸净少量的残留液体,切勿触及沉淀。
5.(选做):配制含有病毒保护试剂的病毒重悬液。每9ml病毒重悬液中加入1ml病毒保护试剂(10X),混匀。可以根据后续浓缩后病毒的用途选择是否添加病毒保护试剂。如果后续考虑用于培养的细胞或组织的感染,推荐添加病毒保护试剂;如果后续最终考虑用于动物实验,不宜添加病毒保护试剂。如果后续用于抽提病毒的DNA或RNA,是否添加病毒保护试剂均可。
6.加入原病毒上清液体积的1-10%的病毒重悬液(根据后续用途选择是否添加病毒保护试剂),静置10min,然后使用移液器小心吹打20-30次,重悬病毒沉淀。吹打时避免产生气泡,剧烈吹打可能导致病毒失活。
注1:如果看不到明显的白色沉淀,就在沉淀可能形成的区域用移液器小心吹打。
注2:白色沉淀的多少并不代表病毒量的多少。白色沉淀中除病毒颗粒外,还有血清蛋白和少量的细胞碎片和基因组DNA等。
7.4℃ 12,000×g离心3-5min,吸取上清即为浓缩的病毒。可以根据后续的实验需要,适当分装后-80℃冻存备用。本步骤的离心沉淀物中包含血清蛋白和少量的细胞碎片和基因组DNA等。
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