碧云天自主研发生产的高纯度叶绿体分离试剂盒(密度梯度法),英文名High-purity Chloroplast Isolation Kit by Density Gradient Centrifugation,是一种从新鲜植物叶片中通过研磨、过滤、离心和密度梯度离心在1小时内快速提取完整的有生物活性的高纯度叶绿体的试剂盒。本试剂盒所获得的叶绿体纯度高,结构高度完整,可用于光合作用电子链的电子传递和磷酸化、叶绿体蛋白的跨膜转运和组装以及体外叶绿体蛋白合成和定位等生物学功能研究,也可以作为起始材料用于叶绿体蛋白的提取以及叶绿体DNA和RNA的分离纯化等。
叶绿体(Chloroplast)是一些藻类(Algae)和高等植物所特有双层膜结构的、进行光合作用的细胞器,参与氨基酸合成、叶绿素合成和脂质生物合成等多种生物代谢过程[1]。在高等植物中叶绿体呈透镜状(Lens-shaped),直径约5-10μm,厚约1-3μm。在高等植物的叶肉细胞中一般含有约50-200个叶绿体,占细胞质的约40%。尽管绝大部分叶绿体存在于叶片中,但它们也在茎、种子和没有成熟的果实中被发现[2, 3]。
本试剂盒采用密度梯度离心(Density gradient centrifugation)的方法,分离并纯化获得高纯度完整的叶绿体。
本试剂盒适用范围广。本试剂盒广泛适用于新鲜的单子叶植物(绿萝、玉米、小麦等)和双子叶植物(拟南芥、烟草、菠菜、大豆、白菜等)等多种类型植物。本试剂盒用于绿萝叶绿体提取的效果请参考图1。
图1.碧云天高纯度叶绿体分离试剂盒(密度梯度法) (C0565)提取绿萝叶绿体效果图。取0.2g新鲜的绿萝叶片剪碎后加入叶绿体提取缓冲液I,在冰上用TissueMaster™一次性塑料研磨杵(E6606)进行研磨直至无大块叶片;将研磨液加入到70μm孔径的BeyoGold™细胞过滤器进行过滤,然后4,200×g,4ºC离心5分钟,弃去上清液,沉淀含有叶绿体。加入300μl叶绿体提取缓冲液II轻轻吹打悬浮沉淀,得到叶绿体粗提液。将得到的300μl叶绿体粗提液小心平铺到500μl的40%密度梯度液上,4,200×g,4ºC离心10分钟,去除上清,保留沉淀,加入20μl叶绿体提取缓冲液II重悬叶绿体沉淀。取10μl叶绿体重悬液置于细胞培养皿中静置10分钟或滴加至载玻片上盖上盖玻片,光学显微镜下观察叶绿体的数量与形态。实际的叶绿体提取效果可能会因实验条件、检测仪器和条件的不同而存在差异,图片仅供参考。
本试剂盒使用便捷。本产品不需要特殊的破碎设备,可以在1小时内快速得到高纯度的完整的有生物活性的叶绿体。
本试剂盒提取叶绿体的产量高。使用本产品每1g叶片能得到约0.1-0.2mg完整的叶绿体。以绿萝为例,使用本产品每1g绿萝叶片能得到0.2mg左右高纯度的完整的叶绿体。
以每次处理0.2g或1g叶片计算,本试剂盒小包装和中包装分别可进行10-50次和50-250次提取。试剂盒中的过滤器仅足够10和50次提取,不足部分推荐购买BeyoGold™细胞过滤器(70μm孔径, 独立纸塑包装, 无菌) (FSTR070)。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C0565S-1 | 叶绿体提取缓冲液I | 100ml |
C0565S-2 | 叶绿体提取缓冲液II | 50ml |
C0565S-3 | 密度梯度分离液 | 11ml |
C0565S-4 | BeyoGold™细胞过滤器 | 10个 |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C0565M-1 | 叶绿体提取缓冲液I | 500ml |
C0565M-2 | 叶绿体提取缓冲液II | 250ml |
C0565M-3 | 密度梯度分离液 | 55ml |
C0565M-4 | BeyoGold™细胞过滤器 | 50个 |
— | 说明书 | 1份 |
4ºC保存,6个月有效。叶绿体提取缓冲液I和叶绿体提取缓冲液II -20ºC保存,密度梯度分离液4ºC保存,BeyoGold™细胞过滤器室温保存,至少一年有效。
注意事项:自备丙酮、超纯水或去离子水、剪刀(FS001)、离心管(FTUB030)和TissueMaster™一次性塑料研磨杵(E6606)或玻璃匀浆器、研钵、匀浆机(E1648/E6600)等研磨设备。超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
叶绿体对温度高度敏感,因此分离叶绿体的所有步骤均需在冰上进行,所用溶液需冰浴处理,离心也需要使用4ºC离心机。
重悬时,如果使用常规吸头,必须要剪掉枪头顶端,使口径变大,轻柔吹打,避免剧烈吹打导致叶绿体破裂。
在实验操作的过程中要避免剧烈震荡或是剧烈吹打,全程保持动作轻柔缓慢,防止叶绿体破裂。
提取得到的叶绿体重悬液非常容易失去活性,如果进行活性检测宜尽快使用。
冻存的试剂须完全融化并混匀后使用。
如果需要更多的细胞过滤器,推荐购买BeyoGold™细胞过滤器(70μm孔径, 独立纸塑包装, 无菌) (FSTR070)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C0565S | 高纯度叶绿体分离试剂盒(密度梯度法) | 10-50次 |
C0565M | 高纯度叶绿体分离试剂盒(密度梯度法) | 50-250次 |
C0566S | 叶绿体分离试剂盒(差速离心法) | 10-50次 |
C0566M | 叶绿体分离试剂盒(差速离心法) | 50-250次 |
C0362S | 植物原生质体分离试剂盒 | 5ml×20次 |
C0563S | 植物原生质体转染试剂盒 | 100次 |
C0563M | 植物原生质体转染试剂盒 | 500次 |
D0045S | 植物基因组DNA小量抽提试剂盒(通用型, 离心柱式) | 100次 |
D0045M | 植物基因组DNA小量抽提试剂盒(通用型, 离心柱式) | 200次 |
D2489-1μg | pRD29B-luc (植物报告基因质粒) | 1μg |
D2489-100μg | pRD29B-luc (植物报告基因质粒) | 100μg |
D2491-1μg | pUBI10-GUS (植物报告基因质粒) | 1μg |
D2491-100μg | pUBI10-GUS (植物报告基因质粒) | 100μg |
D2627-1μg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 1μg |
D2627-100μg | p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) | 100μg |
E6600 | TissueMaster™手持式组织研磨仪 | 1套 |
E6606-20pcs | TissueMaster™一次性塑料研磨杵 | 20支/袋 |
E6606-100pcs | TissueMaster™一次性塑料研磨杵 | 100支/袋 |
FS001 | 普通剪刀(10cm, 直尖) | 1把/袋 |
FS003 | 普通剪刀(12.5cm, 直尖) | 1把/袋 |
FS011 | 普通剪刀(14cm, 直尖) | 1把/袋 |
FSTR040 | BeyoGold™细胞过滤器(40μm孔径, 独立纸塑包装, 无菌) | 100个/盒 |
FSTR070 | BeyoGold™细胞过滤器(70μm孔径, 独立纸塑包装, 无菌) | 100个/盒 |
FSTR100 | BeyoGold™细胞过滤器(100μm孔径, 独立纸塑包装, 无菌) | 100个/盒 |
FTUB515 | BeyoGold™ 15毫升锥形离心管 | 25个/包, 20包/箱 |
FTUB550 | BeyoGold™ 50毫升锥形离心管 | 25个/包, 20包/箱 |
P0043-100ml | 植物Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
P0045-100ml | 植物RIPA裂解液(强) | 100ml |
R0011 | Beyozol (总RNA抽提试剂) | 100ml |
ST876-100ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 100ml |
ST876-500ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 500ml |