碧云天的EDTA脱钙液(EDTA Decalcifying Solution)是一种基于EDTA的温和脱钙试剂，主要用于去除骨组织、钙化组织或病理标本中的钙盐，并且可以最大程度保护组织的形态完整性和生物分子活性。

乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)，分子式为C10H16N2O8，分子量为292.24，CAS number为60-00-4，是一种水溶性二价离子螯合剂，为可逆性的金属蛋白酶抑制剂，可与金属离子如钙(II)、镁(II)、锰(II)、铜(II)、铁(III)及钴(II)等形成络合物而抑制相应金属离子依赖性的酶促反应。

EDTA脱钙液的核心作用机制为螯合反应。EDTA分子中的四个羧酸基团和两个氨基能够与钙离子(Ca²⁺)形成稳定的水溶性络合物。在脱钙过程中，EDTA首先通过配位键与组织中的钙离子特异性结合，生成EDTA-Ca复合物。钙离子被螯合后，不溶性钙盐(如羟基磷灰石)逐渐解离并溶解于溶液中[1]。使用本产品进行脱钙，整体速度较慢，脱钙过程通常需数天至数周，具体时间依组织钙化程度而定。但相较于强酸(如硝酸、甲酸)的快速脱钙法，EDTA的弱螯合性可最大程度保留组织抗原性和核酸完整性，且可通过物理检测方法精准控制脱钙终点，避免过度脱钙导致的组织损伤，尤其适用于后续需进行分子检测的珍贵样本。

EDTA脱钙液主要应用于骨组织、牙齿、钙化肿瘤或血管硬化等样品的预处理，以制备高质量石蜡切片或冰冻切片，辅助诊断骨代谢疾病、骨质疏松、骨肿瘤等病理变化。EDTA脱钙液可保留组织抗原性，从而确保免疫染色(如IHC/IF)特异性信号，辅助脱钙陈旧性或化石骨骼的形态学分析。EDTA脱钙液可维持核酸完整性，经EDTA脱钙液处理后的样品可提取DNA，进行PCR、测序等分子生物学实验。此外，EDTA脱钙液也可以用于钙化淋巴结、钙化胎盘等复杂组织样品的预处理。

本脱钙液有以下特点。使用方便，可直接用于组织的脱钙，无需稀释；温和高效，通过螯合作用选择性去除钙离子，避免强酸或强碱对组织的过度损伤；保留形态，维持细胞与组织的精细结构，减少收缩或变形，适用于高精度病理分析[2]；兼容性强，经本产品脱钙处理后的组织样品可兼容多种后续检测技术，如HE染色、免疫染色(IHC/IF)、原位杂交(ISH)及分子生物学实验(如DNA/RNA提取)等[3]；稳定性佳，常温保存，有效期长，操作简便，适合实验室常规使用。

按照每个样品需要10ml EDTA脱钙液计算，每500ml的本产品可以用于50个样品的脱钙。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C0167-500ml	EDTA脱钙液	500ml
C0167-3L	EDTA脱钙液	500ml×6
—	说明书	1份

保存条件：

室温保存，一年有效。4ºC或-20ºC可以保存更长时间。

注意事项：

处理关节软骨组织样品时如果需要保存蛋白聚糖，请勿使用本脱钙液。

使用EDTA脱钙液脱钙后，组织可能会稍微变硬。

为了提高本脱钙液的脱钙速度，骨组织取材应尽量切薄，通常厚度不大于5mm。

脱钙温度不宜太高，通常以室温为宜。适当加温可以加快脱钙速度，但可能会破坏组织中的核酸而影响后继的染色效果。通常不应超过37-40ºC，尤其不可高于60ºC，温度过高容易使骨组织松散解体。

脱钙应该彻底，避免脱钙不足或者过度，应在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间。

在脱钙过程中须定时检查脱钙程度，以避免脱钙过度，脱钙过度会可能会造成组织的损伤，进而影响后续实验。

应使用玻璃容器作为脱钙用具，避免使用金属容器。

骨组织脱钙应先固定再脱钙，或者固定和脱钙同时进行，避免先脱钙后固定，以减少组织的损伤。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.组织样品的准备。固定组织后，将组织浸没于PBS (C0221A)中，置于摇床上，洗涤3次，每次20分钟。随后将组织浸没于蒸馏水中，置于摇床上，洗涤3次，每次20分钟。推荐使用碧云天的BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)或BeyoShaker™数字式圆周摇床(E6676)。
2.脱钙。将组织转移至20-30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10-30天或者更长时间。脱钙期间，每周更换一次新的EDTA脱钙液，直至脱钙终点。
注1：如果需要加快脱钙速度，缩短脱钙时间，可以适当提高温度至37ºC进行脱钙。也可采用微波快速脱钙法，即将微波炉设置在200W左右的档位，每次加热5分钟，依据组织厚度和密度重复3-5次，并每次间隔3-5分钟以确保微波加热后的脱钙液的温度不会太高。
注2：脱钙期间，按步骤3定期观察脱钙情况，避免脱钙过度。
3.脱钙终点确定。利用针扎、手掐、钳夹等物理方法对组织脱钙程度进行检测。当组织变软或者针扎的时候没有阻力感即可终止脱钙，物理检测法会对组织结构造成一定的损伤，尽量避免用力过大或者反复检测。
4.清洗。用蒸馏水冲洗数次。
5.后续处理和检测。根据实验设计对经脱钙处理后的组织样品进行后续处理和检测。
注：也可以酌情先固定切片，然后再进行脱钙处理。
参考文献：
1.Seo J, Kim H, Min J, Kim Y, Jeon IH, et al. J Orthop Surg Res. 2023. 18(1):615.
2.Freitas EC, Dalmolin SP, Silva MM, Oliveira FH, Pilar EFS. Biotech Histochem. 2022. 97(5):372-381.
3.Washburn E, Tang X, Caruso C, Walls M, Han B. Hum Pathol. 2021. 117:108-114.
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