碧云天生产的CellTiter-Lumi™ II发光法细胞活力检测试剂盒(CellTiter-Lumi™ II Luminescent Cell Viability Assay Kit)，简称CTL II发光法细胞活力检测试剂盒或CTL II，是一种通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而用于超高灵敏度、超宽线性范围定量检测活细胞数目的试剂盒。

本产品是CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(简称CTL，产品编号为C0065)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。CTL为即用型液体，优点是无需配制即可以直接使用，缺点是长期保存需要置于-80ºC，如果在-20ºC保存时间较长后检测效果会逐渐下降；本产品，即CTL II，为CTL的冻干粉版本，使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用，优点是在-20ºC保存特别稳定。

本试剂盒的性能基本达到甚至在有些方面优于国外同类产品。本产品的用途与CellTiter-Lumi™ Plus Luminescent Cell Viability Assay(简称CTL Plus)及Promega公司的CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(简称CellTiter-Glo®或CTG)基本相同，检测灵敏度和发光检测数据略优于CTL Plus，显著优于CTG，线性范围和CTL Plus和CTG相近，但检测上限和发光检测数据随时间的稳定性稍稍低于CTL Plus和CTG。本产品与CTL Plus和国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

本产品线性范围宽。96孔板中，在12个至3万个细胞范围内有良好的线性关系。不同细胞的检测数量上限会有显著不同，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到3万个后可能会不呈现线性关系，但化学发光读数还是会继续升高的。如果检测的细胞数量超过3万，推荐使用检测上限更高的CellTiter-Lumi™ Plus II发光法细胞活力检测试剂盒(C0057)或CellTiter-Lumi™ Plus发光法细胞活力检测试剂盒(C0068)。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，通常在3万个细胞数量范围内，本产品的发光效果比CTL Plus强约20-100%，比国外同类产品强1-3倍，实测效果会因细胞种类的不同而有所不同。例如，对于NIH3T3和HeLa细胞的检测，CTL的发光强度比CTL Plus高约40-100%，比国外同类产品强约2-3倍；而对于Jurkat细胞的检测，CTL的发光强度则比CTL Plus强约20-70% ，比国外同类产品强约1.5-3倍(图1D)。

本产品检测灵敏度高。使用本产品检测细胞数量仅为12个/孔时，发光强度可达空白孔的2倍左右。本产品与CTL Plus和国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

图1. 本产品CellTiter-Lumi™ II Luminescent Cell Viability Assay Kit (CTL II)和同类产品CellTiter-Lumi™ Plus Luminescent Cell Viability Assay (CTL Plus)及国外同类产品(Competitor P)对不同细胞的检测效果。CTL II与碧云天生产的CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(CTL)的检测效果完全一致。图A-C为CTL即CTL II、CTL Plus和Competitor P对不同数量HeLa细胞在白色96孔板中的检测效果，图D为CTL即CTL II、CTL Plus和Competitor P对2.5万个/孔NIH3T3、HeLa和Jurkat细胞在白色96孔板中的检测效果。实际读数会因细胞种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考

本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约10分钟。本产品比常见的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它细胞活力测定方法更加简单快捷。只需用试剂盒提供的检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成CellTiter-Lumi™ II发光法检测试剂后，与培养细胞等体积混合，反应10分钟后即可进行化学发光检测。无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。并且化学发光比较稳定，在反应开始后的10分钟内下降不超过10%，30分钟内的下降不超过30%。

本产品稳定性好。本产品在-20℃可以长期保存，配制成CellTiter-Lumi™ II 发光法检测试剂后的稳定性也非常好，反复冻融5次对检测效果基本无影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。CellTiter-Lumi™ II 发光法检测试剂在4℃保存3天对检测效果无显著影响，保存7天检测效果下降不超过10%。在室温保存1天仍可保留80%以上的检测效果。在37℃保存1天可保持60%以上的检测效果。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品检测，也非常适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。

ATP，作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP是细胞新陈代谢的一个重要指标，也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子，并和活细胞数目成良好的线性关系。因此，ATP含量能很好地反应活细胞的数目，即本试剂盒可以通过测定ATP含量来进行细胞计数或检测细胞活力。

本试剂盒通过ATP检测细胞活力的原理参见图2。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应，ATP可以通过测定化学发光来进行定量。由于ATP含量能很好地反映活细胞的数目，而ATP含量和发光强度成正比，这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出细胞活力或细胞数目。

图2. 碧云天CellTiter-Lumi™ II发光法细胞活力检测试剂盒(CTL II)检测ATP的原理图。

碧云天的CellTiter-Lumi™系列产品的主要特点和差异请参考下表。对于待检测的细胞量可能超过3万时，推荐选购Plus系列；对于检测数据的稳定性要求特别高时，推荐选购Steady系列产品；对于希望在-20ºC长期稳定保存CTL系列产品的情况，推荐选购II系列的冻干粉包装。

碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考http://www.beyotime.com/support/cell-proliferation.htm。

对于96孔板，推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂，总体积为200μl，此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板，推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂，总体积为50μl，此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测，但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。

-20℃避光保存，至少两年有效。 检测缓冲液和检测底物混合后配制成的CellTiter-Lumi™ II发光法检测试剂， -20℃避光保存，至少一年有效；-80℃避光保存，至少两年有效。

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购本产品，即CellTiter-Lumi™ II；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(C0065)。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在不超过25℃的室温或20-25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。

本试剂盒的检测缓冲液和检测底物混合后配制成的CellTiter-Lumi™ II发光法检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试CellTiter-Lumi™ II发光法检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为保证检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

使用说明中提供了检测ATP标准品的方法，实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。