BeyoIHC™ PAX-2 Rabbit Monoclonal Antibody
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产品编号 AG8604
数量
¥ 826.00
产品包装:
50μl
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来源 用途 交叉反应性 理论分子量 实际分子量
Rabbit IHC [[Human]] 45kDa -

IHC-P, Immunohistochemistry-paraffin; IHC-Fr, Immunohistochemistry-frozen; IF, Immunofluorescence;

ICC, Immunocytochemistry; WB, Western blot; FC, Flow Cytometry.

建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整):

IHC-P IHC-Fr IF/ICC WB FC
1:100-1:200 N/D (not determined) N/D N/D N/D

BeyoIHC™系列抗体是经过测试适用于免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)的高品质抗体,也称病理抗体,很大一部分为重组兔单克隆抗体(Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody),通过先进的兔单克隆抗体技术平台研发并生产,无需获取动物的脾脏,仅需分离抗原特异性B细胞并通过基因工程方法克隆抗体基因,然后在哺乳动物细胞中重组表达并最终纯化获得[1-2]。

BeyoIHC™抗体灵敏度更高,背景更低,染色更清晰,定位更精准。BeyoIHC™系列抗体通过反复的筛选和测试,确保灵敏度高、背景低、染色效果好[3]。

BeyoIHC™抗体特异性更强,染色结果更为准确。BeyoIHC™系列抗体大部分都是精心筛选的高效价单克隆抗体,是由单个B细胞淋巴瘤表达,只针对一个抗原表位发生特定的免疫反应,应用于免疫组化时特异性更强,染色结果更为准确[3]。

BeyoIHC™抗体一致性更好,批次间差异更小,结果重复性更好。BeyoIHC™系列抗体很大一部分是重组抗体,具有确定的抗体序列,使用不含任何动物源性物质培养液的哺乳细胞表达体系,生产的可重复性、一致性高,批次间差异小,可避免杂交瘤细胞制备过程中的基因丢失、基因突变和细胞株漂移等问题,所制备的重组抗体的重复性更好[3]。

BeyoIHC™系列抗体主要用于福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixed paraffin embedded, FFPE)样品的免疫组织化学染色(Immunohistochemistry-paraffin or Immunohistochemistry paraffin-embedded, IHC-P)。对于冰冻切片免疫组织化学(Immunohistochemistry frozen sections, IHC-Fr)、细胞免疫荧光(Immunofluorescence, IF)或免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC)未经测试(Not determined)。同时,BeyoIHC™系列抗体可识别人的相应蛋白,对于小鼠等其它种属很大一部分未经测试。对于未经测试的应用及种属样品,理论上有可能是可以检测的,但须用户自行测试。

BeyoIHC™系列抗体配套提供了免疫染色一抗稀释液,可以用于IHC检测或其它适当用途时的一抗稀释。为进一步提高信噪比,推荐使用QuickBlock™免疫染色一抗稀释液(P0262)SignalUp™免疫染色一抗稀释液(P0277)用于IHC检测。

抗体详细信息如下:

About this Antibody
Name BeyoIHC™ PAX-2 Rabbit Monoclonal Antibody
Category Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (mAb); Primary antibody; IHC抗体
Isotype IgG
Clone number BA1244
Purification method Protein A affinity purification
Positive samples -
Cellular location Nucleus
Customer validation -
Epitope retrieval Heat induced epitope retrieval with Tris-EDTA buffer (pH 9.0).
About the Immunogen
Immunogen Synthetic peptide corresponding to PAX-2 residues within aa300-400 of PAX-2 was used as an immunogen.
Sequence -
Gene ID 5076
SwissProt Q02962
Synonyms FSGS7; PAPRS; PAX2
Category Transcription Factors
Background PAX2 is involved in the development of the nervous and excretory systems including the kidney and urogentical tract, the optic stalk, ear, midbrain-hindbrain junction, and the spinal cord.
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
AG8604 BeyoIHC™ PAX-2 Rabbit Monoclonal Antibody 50µl
AZ060 免疫染色一抗稀释液 10ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。免疫染色一抗稀释液也可以4℃保存,长期不使用推荐-20℃保存,但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。

注意事项:

如果本抗体用于免疫组化(IHC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常可以重复使用1-5次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。

回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000×g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。

提供的免疫染色一抗稀释液也可以用于Western blot (WB)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果,推荐使用Western一抗稀释液(P0023)

抗原修复过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。相关步骤仅供参考,实际可尝试使用实验室习惯方法或根据实验目的进行条件的优化。
1. 免疫染色:
a. 石蜡切片样品的准备(Sample preparation)
(a) 脱蜡:将切片放入二甲苯中脱蜡5分钟,更换成新鲜的二甲苯再脱蜡5分钟,无水乙醇5分钟,更换成新鲜的无水乙醇5分钟,95%乙醇5分钟,80%乙醇1分钟,70%乙醇1分钟,蒸馏水洗1-5分钟。
(b) 抗原修复:一般使用加热抗原修复(Heat-induced epitope retrieval, HIER)的方法进行抗原修复。根据不同的抗原和抗体,可以选择抗体详细信息表格中建议的抗原修复液,或碧云天的Tris-EDTA抗原修复液(50X, pH9.0) (P0084)EDTA抗原修复液(50X) (P0085)柠檬酸钠抗原修复液(50X) (P0081)其它抗原修复液(P0083/P0086/P0088)中。直接取适量抗原修复液于适当容器(例如染色缸等)中,抗原修复液以没过切片为宜,加热至沸腾后将放有切片的染色架浸入修复液中,持续加热15分钟后关火。或者在微波炉内进行抗原修复,抗原修复液以没过切片为宜,中火10分钟至沸腾,停火10分钟保温再转中低火7分钟。自然冷却至室温后,取出切片置于免疫染色洗涤液(P0106)PBS (C0221A)中洗涤3次,每次5分钟。切片稍甩干后用免疫组化笔在组织周围画圈。
b. 封闭(Blocking)
首先加入内源性过氧化物酶封闭液(P0100A),室温封闭5-10分钟后,吸尽内源性过氧化物酶封闭液,蒸馏水冲洗,PBS清洗5分钟,共清洗两次。加入免疫染色封闭液(P0102)QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260),室温封闭30分钟。如果背景较高,可以4℃封闭过夜。
注1:从封闭开始所有的步骤,一定要注意样品的保湿,避免样品的干燥,否则极易产生较高的背景。
注2:在整个免疫染色过程中推荐使用碧云天的BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673),侧向摆动速度比较缓慢,而且也容易让溶液覆盖样品。如果样品比较容易脱落,也可以把所有的步骤放置在桌面上静止进行,即封闭、抗体孵育、洗涤等步骤均不需摇动,但静止操作时宜适当延长作用时间或次数。
c. 一抗孵育(Primary antibody incubation)
(a) 参考一抗的说明书,按照适当比例用提供的免疫染色一抗稀释液或QuickBlock™免疫染色一抗稀释液(P0262)稀释一抗。
(b) 用微型台式真空泵(E0110/E0113)等吸尽封闭液,立即加入稀释好的一抗,室温在摇床上缓慢摇动孵育0.5-1小时,如果一抗孵育1小时效果不佳可4℃孵育过夜。
(c) 回收一抗。加入免疫染色洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5分钟。吸尽洗涤液后,再加入洗涤液,洗涤5分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
d. 二抗孵育(Secondary antibody incubation)
(a) 参考二抗的说明书,用免疫染色(非荧光)二抗稀释液(P0110)QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液(P0267)稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,如辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) (A0208)辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (A0216)等。也可根据具体实验情况使用生物素(Biotin)或碱性磷酸酯酶(AP)标记的二抗,以上二抗可向碧云天订购。
(b) 吸尽洗涤液,立即加入稀释好的二抗,室温避光孵育0.5-1小时,若短时间二抗孵育效果不佳,可适当延长二抗孵育时间。
(c) 回收二抗。加入免疫染色洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5分钟。吸尽洗涤液后,再加入洗涤液,洗涤5分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
e. 蛋白检测(Detection of proteins)
使用DAB法显色,如DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(P0202/P0203),按照说明配制DAB染色工作液,加入适量DAB染色液,确保能够充分覆盖样品样本,避光室温显色3-30分钟,根据实际情况在显微镜下观察显色状态调整样本染色时间。也可根据具体实验情况选择辣根过氧化物酶标记Streptavidin (A0303/A0305)碱性磷酸酯酶标记Streptavidin (A0312)BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(C3206)SABC-HRP Kit (P0603/P0612/P0614)SABC-AP Kit (P0606/P0625/P0628)等进行检测。如有需要复染,可使用苏木素染色液(C0107)孵育3-5分钟,后续进行分化、冲洗返蓝。
f. 镜检拍照(Microscopic examination and photography)
依次将切片放入95%乙醇浸泡脱水30秒,更换新鲜95%乙醇浸泡脱水30秒,无水乙醇浸泡脱水1分钟,更换新鲜无水乙醇浸泡脱水1分钟,二甲苯中透明5分钟,更换新鲜二甲苯透明5分钟,共透明三次。使用中性树胶封片,室温风干后,光学显微镜下拍照。
2. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
3. 本抗体相关应用的代表性图片请参考下图。

Immunohistochemistry of formalin fixed paraffin embedded human kidney cancer using BeyoIHC™ PAX-2 monoclonal antibody at dilution of 1:200.
参考文献:
1. Weber J, Peng H, Rader C. Exp Mol Med. 2017. 49(3):e305.
2. Seeber S, Ros F, Thorey I, Tiefenthaler G, Kaluza K, et al. PLoS One. 2014. 9(2):e86184.
3. Zhang Z, Liu H, Guan Q, Wang L, Yuan H. Front Immunol. 2017. 8:494.
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