问:你好,两个片段与载体相连,能否这样设计?片段1:nt001-3500nt,片段2:3300nt-6000nt,片段1的正向引物加入与载体重叠的序列,片段2的反向引物加入与载体重叠的序列,片段1和片段2本身有200nt的重叠区 小云 2022-08-30 19:54:22
碧云爱答说: 2022-08-31 10:15:04
不能确定具体实验效果的
问:您好,如果片段浓度很低,片段和载体体积超过20ul,是否可以调整体系至50ul? 小云 2022-05-16 17:52:23
碧云爱答说: 2022-05-17 09:34:18
可以按比例放大体系尝试。
问:你好,我想请问一下你们这个产品“从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段都可以成功插入”这句话的意思是多个基因片段的大小都可以是10kb还是说最后无缝克隆得到的最大片段为10kb呢? 小云 2022-04-20 11:49:18
碧云爱答说: 2022-04-22 16:13:34
应该是针对单个片段最大10kb左右,但如果多片段都是10kb,阳性率可能比较低。
问:请问引物设计需要加保护碱基吗? 小云 2021-05-13 10:58:16
碧云爱答说: 2021-05-13 14:20:43
不需要,请参考说明书的示例。
问:请问,三个DNA片段构建成一个载体,如何设计引物呢? 小云 2021-05-07 19:55:54
碧云爱答说: 2021-05-10 13:47:54
三个片段连入一个载体,请参考说明书多片段引物设计示例,仅是3个片段的连接,可以先连接两个片段,再连接第三个。
问:你好,咱们的试剂盒标准体系是20ul,是否可以调整体系到10ul。 小云 2019-12-23 19:28:11
碧云爱答说: 2019-12-24 08:47:23
理论上可以,可以自行尝试效果。
问:试剂盒里给的PUB18线性载体,但是说明书里是pCMV载体,PUC18酶切位点上游15-25bp是什么序列? 小云 2018-11-04 23:44:07
碧云爱答说: 2018-11-05 13:40:12
老师目前是要插入几个片段?
小云说: 2018-11-05 11:43:33
但是说明书要求设计引物时要有15-25个与载体重复的序列,酶切位点只有6个序列,要怎么设计引物
碧云爱答说: 2018-11-05 10:00:38
试剂盒中提供的pUC18是用EcoRI/BamHI双酶切产生的,所以两段的序列自己就可以figure out了。
问:你好,请问线性PUC18两端大约20bp分别是什么序列?
小云 2018-09-19 01:15:06
碧云爱答说: 2018-09-19 10:29:16
试剂盒中提供的pUC18是用EcoRI/BamHI双酶切产生的。
问:你好,请问PUC18线性质粒的序列是多少?
小云 2018-04-14 16:10:47
碧云爱答说: 2018-04-16 17:02:34
目前我们试剂盒中的PUC18线性质粒仅仅是作为对照使用的,量比较少,老师如果有需要可以购买商业化的质粒,具体序列信息需要确认一下。