问:24孔板如果按照底面积换算,那每孔只加不到40ul,后续检测ALP活性的话,每孔样品量不够怎么办?
小云
2023-04-01 21:53:59
碧云爱答说:
2023-04-03 14:47:09
建议多准备点样品,ALP活性测定,样品还需要做复孔
问:裂解完成后,需要用细胞刮板收集细胞吗?还是只需移液枪吸取液体?
小云
2023-02-23 15:53:39
碧云爱答说:
2023-02-24 09:22:48
两种方法均可
问:直接在培养瓶中裂解,和胰酶消化后再裂解,裂解效果会不会受影响?蛋白成分或蛋白量会不会因此改变?
小云
2023-02-13 10:33:22
碧云爱答说:
2023-02-14 13:57:38
可能消化后裂解可以使细胞和裂解液接触更充分,暂无测试数据,感兴趣可以自己通过实验对比一下
问:用这个裂解液裂解细胞还需要超声破碎吗请问?
小云
2022-12-09 18:03:40
碧云爱答说:
2022-12-12 14:34:39
哺乳动物细胞一般可以直接裂解,也可以根据需要超声处理
问:引用:对于细菌或酵母:对于1ml菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用PBS洗涤一次,充分去除液体后,轻轻vortex或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液,轻轻vortex或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。
这里用的溶菌酶的浓度,作用时间等实验方法可以指点一下吗?
小云
2022-10-13 16:06:26
碧云爱答说:
2022-10-13 16:30:10
参考溶菌酶终浓度1mg/ml,冰水浴或冰上30min
问:请问如果细胞接种在胶原蛋白支架上,使用裂解液时是否也会裂解胶原蛋白,导致后续检测时总蛋白浓度偏高?
小云
2022-10-10 20:46:50
碧云爱答说:
2022-10-11 09:18:16
暂无相关经验,需要和接种在孔板上的细胞进行对比
问:请问如果是孔板内有纤维支架,细胞接种于支架上生长,100-200ul裂解液无法完全浸润支架,怎么处理呢? 可以稀释了用来裂解细胞吗?
小云
2022-07-13 11:35:46
碧云爱答说:
2022-07-13 13:57:37
是否考虑增加裂解液用量?蛋白浓度会相应降低
问:裂解细胞膜的效果是不是一般
小云
2022-05-04 17:53:22
碧云爱答说:
2022-05-05 10:55:40
是的,本品为比较温和的裂解液。
问:请问裂解细胞后用于ALP检测,PSMF要添加吗?裂解15-20min后需要立即离心取上清吗?能不能放-20保存?
小云
2022-01-06 12:24:59
碧云爱答说:
2022-01-27 10:30:32
不加PSMF。离心取上清,理论上可以-80℃冻存,但需避免反复冻融。
问:从-20拿出来以后,可以室温下或者37℃水浴化开吗?
小云
2021-12-13 09:21:36
碧云爱答说:
2021-12-15 13:36:37
稍微温育一下可以的。