问：请问重组完成后片段和载体完成了重组，能被测序检测到，但是附近片段中间却出现了一段基因缺失是怎么回事？有没有可能跟片段太大了有关？片段3k多，载体5k多，加起来9k的大质粒，分段重组是否会好一些？
小云
2023-07-10 10:57:57
碧云爱答说：
2023-07-13 14:20:29
取了几个克隆测序的，都是这个情况吗，有没有重复实验再看看？目前不好确定原因，可以通过官网右上角QQ发一下详细实验情况。和片段大小未必有关，插入片段可以从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段
问：接上一个问题，-20℃保存时刚拿出来有一点冻结粘稠状态，冰上解冻后是正常澄清透亮液体，会影响产品使用吗？是正常现象吗？
以及14bp的同源臂是否略短？影响重组效率
小云
2023-05-16 10:04:54
碧云爱答说：
2023-05-16 16:37:29
不影响使用。14bp稍短，不太符合要求，15-25bp
问：请问什么叫感受态细胞对重组反应体系过敏？
小云
2023-05-10 20:31:15
碧云爱答说：
2023-05-11 14:17:41
反应体系试剂直接影响感受态细胞，从而导致转化效率降低
问：-20℃保存时刚拿出来有一点冻结粘稠状态，会影响产品使用吗？是正常现象吗？
小云
2023-05-10 18:26:32
碧云爱答说：
2023-05-11 11:17:18
冰上解冻后混匀，看下溶液状态
问：运用贵公司无缝克隆试用装做克隆时，阳性克隆有很多，挑选了10个单菌落测序，但是测序结果显示连接的地方总有一些碱基对的突变，缺失，这种情况是什么原因呢？望解答！
小云
2023-02-27 04:06:52
碧云爱答说：
2023-03-01 15:01:50
请参考常见问题分析：2阳性率过低
问：请问，直接用引物（单链DNA）进行组装可以吗？组装之前要进行PCR吗？
小云
2022-11-25 19:45:10
碧云爱答说：
2022-11-30 16:14:17
如果待插入片段是非常小的片段，例如20-70bp，可以通过单链DNA(常被称为引物)的合成和退火进行制备；如果待插入片段的长度比较长不能直接进行合成，可以通过PCR扩增的方法进行制备
问：线性化载体和目的片段链接涂平板后没有阳性克隆，用试剂盒里的线性化载体和DNA fragment也没有阳性克隆，说明是试剂盒不工作了吗？
小云
2022-11-05 10:23:57
碧云爱答说：
2022-11-07 09:08:26
请您提供订单编号和重复试验条件反馈至info@beyotime.com，阳性对照做不出来有问题的
问：8500pb的载体连接2500bp的片段，发现使用该试剂盒以后，载体都是自连，请问是什么原因。
小云
2022-10-22 17:40:18
碧云爱答说：
2022-10-26 10:10:00
线性化载体通过酶切还是PCR制备的？阳性对照效果如何？优化插入片段与载体的摩尔比
问：在插入位置没有合适的酶切位点，沿3'端到5'端方向外切DNA可以在插入位置下游使用酶切后，插入入目的片段吗？
小云
2022-09-22 14:36:25
问：该试剂盒是否可以用于删除质粒上的大片段，即在删除片段的两端开口设计一对有overlap的引物
小云
2022-07-12 16:27:05
碧云爱答说：
2022-07-13 14:56:26
相当于载体做双酶切，再进行同源重组？应该可以的