问：你好，两个片段与载体相连，能否这样设计？片段1：nt001-3500nt，片段2:3300nt-6000nt，片段1的正向引物加入与载体重叠的序列，片段2的反向引物加入与载体重叠的序列，片段1和片段2本身有200nt的重叠区
小云
2022-08-30 19:54:22
碧云爱答说：
2022-08-31 10:15:04
不能确定具体实验效果的
问：您好，如果片段浓度很低，片段和载体体积超过20ul，是否可以调整体系至50ul？
小云
2022-05-16 17:52:23
碧云爱答说：
2022-05-17 09:34:18
可以按比例放大体系尝试。
问：你好，我想请问一下你们这个产品“从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段都可以成功插入”这句话的意思是多个基因片段的大小都可以是10kb还是说最后无缝克隆得到的最大片段为10kb呢？
小云
2022-04-20 11:49:18
碧云爱答说：
2022-04-22 16:13:34
应该是针对单个片段最大10kb左右，但如果多片段都是10kb，阳性率可能比较低。
问：请问引物设计需要加保护碱基吗?
小云
2021-05-13 10:58:16
碧云爱答说：
2021-05-13 14:20:43
不需要，请参考说明书的示例。
问：请问，三个DNA片段构建成一个载体，如何设计引物呢？
小云
2021-05-07 19:55:54
碧云爱答说：
2021-05-10 13:47:54
三个片段连入一个载体，请参考说明书多片段引物设计示例，仅是3个片段的连接，可以先连接两个片段，再连接第三个。
问：你好，咱们的试剂盒标准体系是20ul,是否可以调整体系到10ul。
小云
2019-12-23 19:28:11
碧云爱答说：
2019-12-24 08:47:23
理论上可以，可以自行尝试效果。
问：试剂盒里给的PUB18线性载体，但是说明书里是pCMV载体，PUC18酶切位点上游15-25bp是什么序列？
小云
2018-11-04 23:44:07
碧云爱答说：
2018-11-05 13:40:12
老师目前是要插入几个片段？
小云说：
2018-11-05 11:43:33
但是说明书要求设计引物时要有15-25个与载体重复的序列，酶切位点只有6个序列，要怎么设计引物
碧云爱答说：
2018-11-05 10:00:38
试剂盒中提供的pUC18是用EcoRI/BamHI双酶切产生的，所以两段的序列自己就可以figure out了。
问：你好，请问线性PUC18两端大约20bp分别是什么序列？
小云
2018-09-19 01:15:06
碧云爱答说：
2018-09-19 10:29:16
试剂盒中提供的pUC18是用EcoRI/BamHI双酶切产生的。
问：你好，请问PUC18线性质粒的序列是多少？
小云
2018-04-14 16:10:47
碧云爱答说：
2018-04-16 17:02:34
目前我们试剂盒中的PUC18线性质粒仅仅是作为对照使用的，量比较少，老师如果有需要可以购买商业化的质粒，具体序列信息需要确认一下。