CRISPR/Cas9已经成为现在最广泛使用的基因编辑系统了，在使用该系统进行基因编辑时终究绕不过“单克隆筛选与培养”，辛辛苦苦挑出了单克隆，等了好久好久好久看着细胞终于由一个变成两个……变成一盘，两盘……一检测，sorry……您的基因编辑未成功，按#号键返回上一级，结束请挂机……
其实！只需要利用碧云天BeyoCRISPR™ Surrogate GFP Reporter构建试剂盒，按说明书转入相应质粒，仅需根据荧光即可轻松判断单个细胞是否成功发生基因编辑！让您的基因编辑更高效！更直观！更便捷
图1.碧云天BeyoCRISPR™基因编辑Surrogate GFP Reporter构建试剂盒(D8403)构建的替身报告质粒的基因编辑示踪效果图。仅在转染靶向sgRNA质粒的细胞中同时观察到RFP及GFP荧光信号，GFP荧光信号的产生来自发生基因编辑的细胞。
产品原理
基于替身报告基因(Surrogate Reporter)技术，将与靶基因序列一致的外源片段定向非移码非终止性插入至预先设计的本试剂盒提供的载体中，在未发生基因编辑的情况下，GFP基因序列处于表达框外，细胞仅表达处于表达框内的红色荧光蛋白。当Cas9及相应sgRNA一起表达，并且发生基因编辑时，Cas9通过sgRNA靶向识别两个荧光蛋白之间插入的特异性替身序列，诱导靶位点双链断裂，并在修复后发生移码突变，使终止密码子因为移码而失效，导致原本处于表达框外的GFP移码至与RFP同一表达框内，从而导致细胞中红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白的双重表达，实现基因编辑的示踪检测。后续可以通过流式细胞仪进一步富集RFP/GFP双阳性细胞，从而大幅提升基因敲除细胞的获得效率，实现相应的基因编辑细胞的快速富集。
图2.碧云天BeyoCRISPR™基因编辑Surrogate GFP Reporter构建试剂盒(D8403)中pCMV-RFP-STOP-GFP质粒图谱。
产品特点
- 高效克隆：本试剂盒提供超快速DNA连接酶，在25℃条件下连接5分钟即可在后续实验中获得较多克隆菌落，且克隆阳性率可达100%；
- 使用便捷：本试剂盒提供线性化的载体，用户仅需将设计的Target-specific DNA oligos按照说明进行退火及连接即可进行转化涂板，无需额外的载体处理步骤，快速便捷；
- 选择多样：不仅提供成套的BeyoCRISPR™ Surrogate GFP Reporter构建试剂盒（D8403S），同时提供未线性化的替身报告基因载体质粒pCMV-RFP-STOP-GFP (Surrogate Reporter) (D8414)及基于替身报告基因的可用于sgRNA效率快速筛选的完整质粒试剂盒BeyoCRISPR™ sgRNA筛选试剂盒(替身报告基因法) (D8407)。
产品信息
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
| D8403S | BeyoCRISPR™ Surrogate GFP Reporter构建试剂盒 | 10次 | |
| D8407S | BeyoCRISPR™ sgRNA筛选试剂盒(替身报告基因法) | 5μg/each | |
| D8414-1μg | pCMV-RFP-STOP-GFP (Surrogate Reporter) | 1μg | |
| D8414-100μg | pCMV-RFP-STOP-GFP (Surrogate Reporter) | 100μg |