利刃出鞘!轻松搞定自噬研究!

多种产品,选择灵活,使用方便,更有超高性价比!

更多特色产品>>

我们都知道2016年大隅良典因细胞自噬获得诺贝尔医学或生理学奖,所以大家即便不做细胞自噬的相关研究,也基本都听过这个名词。那么什么叫细胞自噬呢?
自噬其实是细胞内的一种「自食(Self-eating)」的现象,字面上的理解也就是自己吃自己。
不过这里的「自噬」不是将自己杀死,实则是一种细胞自身成分降解和循环的基本过程。
简单来说就是:细胞里有一个吃货,叫“溶酶体”,它还有个专门负责给它找吃的并送货上门一条龙服务的小弟,叫“自噬体”,大佬饿了,小弟就要在细胞里到处找东西给大佬吃。
当然,大佬还是大佬,不是什么东西都吃的,作为一个有节操的吃货,大佬专挑蜕变的、破损的细胞成分下嘴。而这个过程,就是“细胞自噬”。
而自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用,自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。这一点我们可以从发表的文章数量上看出来:

图1:2006-2019年自噬研究论文数目增长图(数据来源于NCBI)

自噬过程中会涉及到很多的蛋白发挥作用,其中p62与LC3B是自噬研究中的明星蛋白。下面就让小编为大家慢慢道来~
LC3B蛋白
LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白,具有125个氨基酸残基。在蛋白合成后,被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白,从而暴露出C端的甘氨酸,人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,成为LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上,在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。这种定位信息可作为自噬膜的常用标记,还可监控其发展变化的过程。
P62蛋白
p62也称sequestosome I (SQSTM1),在多细胞生物(不包括植物和真菌)中高度保守,主要分布于细胞质,也可以定位于细胞核、自噬体(autophagosome)和溶酶体(lysosome)中。p62可作为将要被自噬作用降解的小泡的受体,也可作为要被清除的泛素化蛋白聚集物的受体。p62蛋白可结合泛素,也可与LC3结合,从而靶向自噬体并促进泛素化蛋白的清除。

碧云天最新推出细胞自噬研究新利器!帮您轻松搞定细胞自噬检测!

质粒
小编为大家整理了这几种新品质粒的相关特点,详情见下表:

产品名称 启动子类型 抗性 荧光颜色 是否可稳转 筛选方式
pCMV-GFP-LC3B CMV启动子 卡那霉素 绿色荧光 可以使用G418筛选
pCMV-GFP-p62 CMV启动子 卡那霉素 绿色荧光 可以使用G418筛选
pCMV-mCherry-p62 CMV启动子 卡那霉素 红色荧光 可以使用G418筛选
pCMV-mCherry-GFP-LC3B CMV启动子 卡那霉素 红绿双色荧光 可以使用G418筛选

pCMV-GFP-LC3B/ pCMV-GFP-p62是碧云天自行研发的在哺乳动物细胞中表达GFP标签的人源LC3B/p62 融合蛋白的质粒,转染细胞后能够在靶细胞中高效表达绿色荧光蛋白GFP标签的LC3B或p62融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光。在用pCMV-GFP-LC3B转染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。在用pCMV-GFP-p62转染细胞后,GFP-p62通常以绿色点状 (puncta)或较为弥散的斑块状(speckles)荧光存在于细胞质和细胞核中。在自噬被抑制的情况下,这种绿色的点状或斑块状物其大小会变大而且数目会变多。
产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装 产品价格
D2815-1μg pCMV-GFP-LC3B 1μg
D2815-100μg pCMV-GFP-LC3B 100μg
D2817-1μg pCMV-GFP-p62 1μg
D2817-100μg pCMV-GFP-p62 100μg

mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白,溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭,而mCherry则更为稳定。pCMV-mCherry-p62是碧云天研发的在哺乳动物细胞中表达红色mCherry标签的人源p62融合蛋白的质粒。转染后能够在靶细胞中高效表达带有红色荧光蛋白mCherry标签的p62融合蛋白,呈现明亮的红色荧光。
产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装 产品价格
D2818-1μg pCMV-mCherry-p62 1μg
D2818-100μg pCMV-mCherry-p62 100μg

自噬小体在与溶酶体融合过程中,GFP会被溶酶体酸性环境所淬灭,这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度;此时可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此,通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白,可以更加有效地追踪自噬过程。
碧云天研发了可以在哺乳动物细胞中同时表达红色mCherry和绿色GFP双标签的人源LC3B融合蛋白的质粒pCMV-mCherry-GFP-LC3B,转染后能够在靶细胞中高效表达带有红色荧光蛋白mCherry和绿色荧光蛋白GFP双重标签的LC3B的融合蛋白,呈现明亮的红色和绿色荧光。
产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装 产品价格
D2816-1μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 1μg
D2816-100μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 100μg

腺病毒
除了质粒之外,说到自噬研究怎么可以缺少腺病毒呢!

Ad-GFP-p62Ad-mCherry-p62是碧云天自行研发的重组腺病毒,感染后能够在靶细胞中有效表达GFP或mCherry和p62的融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光或红色荧光,可以用于细胞自噬的检测。该系列腺病毒采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统,感染普通的细胞后不能进行扩增和重组,从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。感染细胞后,荧光显微镜下GFP-p62通常以绿色点状 (puncta)或较为弥散的斑块状(speckles)荧光存在于细胞质和细胞核中。在自噬被抑制的情况下,这种绿色的点状或斑块状物其大小会变大而且数目会变多。mCherry-p62则为红色荧光。
感染效率也超优秀!有图为证:

图2. Ad-GFP-p62感染NIH3T3细胞48小时后进行Hoechst 33342染色的效果图。图中可见清晰的点状或斑块状分布的p62的绿色荧光。

图3. Ad-mCherry-p62感染NIH3T3细胞48小时后进行Hoechst 33342染色的效果图。图中可见清晰的点状或斑块状分布的p62的红色荧光。

此外,我们还可提供表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒以及表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒。更有全新升级改造后的AdPlus-mCherry-GFP-LC3B腺病毒产品(点击了解),全面助力自噬研究!
产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装 产品价格
C3015-1ml Ad-GFP-p62 1ml
C3015-10ml Ad-GFP-p62 10ml
C3016-1ml Ad-mCherry-p62 1ml
C3016-10ml Ad-mCherry-p62 10ml
C3006-1ml Ad-GFP-LC3B 1ml
C3006-10ml Ad-GFP-LC3B 10ml
C3011-1ml Ad-mCherry-GFP-LC3B 1ml
C3011-10ml Ad-mCherry-GFP-LC3B 10ml
C3012-1ml AdPlus-mCherry-GFP-LC3B 1ml
C3012-10ml AdPlus-mCherry-GFP-LC3B 10ml

抗体
除了质粒和腺病毒之外,抗体在自噬研究中也是不可或缺的。我们可提供多种类型抗体供您选购!
产品信息:

产品编号 产品名称 包装 产品价格
AL221 LC3B抗体(兔多抗) >20次
AF5225 LC3B Rabbit Polyclonal Antibody (KO Validated) 50μl
AF1720 MAP1LC3A Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
AF0279 Sequestosome-1 Mouse Monoclonal Antibody 50μl
AF5312 SQSTM1/p62 Rabbit Polyclonal Antibody (KO Validated) 50μl
AF6246 ATG3 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF2269 ATG5 Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
AA820 Atg7抗体(兔多抗) >20次
AF2023 Apg7 Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
AF2083 ATG9A Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
AF6249 ATG13 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF6252 ATG16L1 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF5123 Beclin 1 Rabbit Polyclonal Antibody (KO Validated) 50μl
AF8307 ULk1 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF6279 BAG1 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF6330 BNIP3 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF6333 BNIP3L Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF7353 LAMP1 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF1036 LAMP2a Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
AF6594 CTSB Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF8310 UVRAG Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AF8073 STING/TMEM173 Rabbit Polyclonal Antibody 50μl
AA393 Phospho-AMPKα(Thr172)抗体(兔单抗) >20次
AF5869 Phospho-mTOR (Ser2448) Rabbit Polyclonal Antibody 50μl

多种产品,选择灵活,使用方便,更有超高性价比!
赶快根据自己的需要选购吧!