运用MALBAC®技术对单个细胞基因组进行扩增，结合序列捕获技术，采用特制的探针将全基因组外显子组/目标区域DNA序列捕获并富集后，进行高通量测序的基因组分析。单细胞外显子组&目标区域测序是一种选择基因组的编码序列的高效策略。该方法能够获得指定外显子组/目标区域的遗传信息，极大的提高了基因组中外显子区域的研究效率。外显子测序相对于基因组重测序成本较低，对研究已知基因的SNP、Indel等具有较大的优势。单细胞外显子&目标区域测序可用于识别和研究与疾病、细胞分化相关的编码区域内的结构变异。结合大量的公共数据库提供的外显子数据，有利于更好地解释所得变异结构之间的关联和致病机理。

碧云天高通量测序与数据分析技术服务项目表：

备注：质检首次免费，如果样品首次质检不通过，后续再进行质检每样加收100元。核酸抽提与质检、自制文库质检以及数据分析报价如下。

碧云天高通量测序样品制备与质检技术服务项目表：

注：以上样品制备与质检技术服务项目仅作为高通量测序的配套服务，不单独提供相应服务。

碧云天高通量测序技术服务询价与订购：

1. 请您下载并填写《 碧云天高通量测序服务询价表》，发送至ngs@beyotime.com，我们将为您设计最佳方案。
2. 若有订购意向，碧云天的高通量测序技术服务人员会与您联系，并签订《碧云天高通量测序技术服务协议书》。
3. 送样时，请下载并填写《碧云天高通量测序生物样品信息表》，发送至ngs@beyotime.com或碧云天高通量测序技术服务人员邮箱。样品的具体要求参见《碧云天高通量测序生物送样要求》。

碧云天高通量测序技术服务优势：

1. 技术经验丰富：碧云天拥有强大的技术团队，具有多年的核酸纯化试剂盒开发经验，在核酸样品处理方面有丰富的操作经验。
2. 分析能力强：碧云天有专业的生物信息分析团队，为您提供完善的分析服务。
3. 服务全面快速：碧云天有多年的试剂研发经验，有完备的分子生物学产品线和完善的生物技术服务体系，可为您后继实验提供跟踪服务。另外，我们承诺以最快的速度去解决您遇到的问题。
4. 实验平台灵活：碧云天现在主要利用主流的Illumina平台为主，可以根据实验目的和要求灵活运用不同的实验平台的优势。
5. 性价比高：碧云天以最优惠的价格为您提供最全面的服务，帮助您有效节约实验成本。

碧云天高通量测序技术服务客户须知：

1. 样品寄出前，请给ngs@beyotime.com或碧云天高通量测序技术服务人员邮箱发送一份填写完整的电子版《碧云天高通量测序生物样品信息表》；如有特殊情况，请在快递发出前与碧云天高通量测序技术服务人员电话联系，比如客户自送样品、提前寄送样品、有其它物品随样品一起快递需要额外点收等，以便安排人手，防止丢失。
2. 请将填写完整的纸质版《碧云天高通量测序生物样品信息表》以及其它技术资料(如有)密封于塑料袋内，随样品一起寄出；协议书和硬盘(数据量较大，需硬盘存储)请另单快递给对应接收人员，不要与样品一起快递，既避免物流分拣环节导致合同和硬盘遗失，也避免干冰或蓝冰冷凝水可能损坏文件和硬盘。
3. 如果需要进行生物信息学分析，请在《碧云天高通量测序生物样品信息表》的“项目描述”栏目里注明。
4. 样品置于1.5ml或其它型号的低吸附离心管里；管上清楚标明样品名称，样品管上的名称要与《碧云天高通量测序生物样品信息表》一致，请双人核实无误；用parafilm膜把样品管缠紧密封好；将样品管置于保护用的50ml离心管或其它容器里，用适量纸、纱布或棉花塞紧，防止样品管晃荡，旋紧盖子。
5. 根据样品类型选择室温、蓝冰或者干冰包装，选择最快的运输方式以免样品降解；合理安排发货时间，避免周六、周日或法定节假日到达，以免样品丢失。低温运输采用安全的干冰，不要用危险的液氮；液氮如果渗进样品管，在温度发生变化时因体积膨胀有可能导致爆炸，毁坏样品。
6. 项目结束后，剩余样品免费保存6个月；如果需要延长保存期或者返还，请提前与碧云天高通量测序技术服务人员联系。
7. 其它详细的样品要求请见《碧云天高通量测序生物送样要求》。

碧云天单细胞外显子组&目标区域测序技术服务项目明细：

单细胞外显子组&目标区域测序：运用MALBAC®技术对单个细胞基因组进行扩增，结合序列捕获技术将外显子组/目标区域DNA序列捕获并富集后，进行高通量测序。可用于识别和研究与疾病、细胞分化相关的编码区域内的结构变异，有利于更好地解释所得变异结构之间的关联和致病机理。

技术流程
MALBAC扩增原理 技术优势

1. 运用MALBAC®多重退火环状循环扩增技术，解决了基因组扩增对微量初始模板过大的扩增偏倚，使得单细胞中90%的基因组能够被测序，样品起始量可低至0.5pg
2. 高性价比：较低价格得到外显子组/目标区域序列的基因信息
3. 高覆盖度：几十Mb的测序区域，多种选择，更高的测序深度
4. 高信息密度：只针对编码区域/目标区域进行测序，更大可能发现引起功能改变的突变

技术参数

测序平台与方式：HiSeq, PE150
测序数据量：建议10Gb/样本

测序及基础分析周期

按标准流程（不包括高级信息分析），100个样品，平均深度50X，周期约为50个工作日
按标准流程（不包括高级信息分析），1000个样品（目标区域大小1 Mb），周期约为140个工作日（含芯片定制及预实验时间）

样品要求

1. 样品类型： 已分离的单细胞样本或DNA 样品
2. 样品需求量（单次）： 样品建议为单细胞或DNA总量≥10pg

数据分析内容

标准信息分析
1. 数据产出统计及碱基质量评估
2. 去除低质量、污染及接头序列
3. 比对（测序深度及覆盖度等分析）
4. SNV/Indel分析及在dbSNP数据库的注释

高级信息分析 
1. SNV/Indel对应基因突变高级功能注释（dbSNP, clinvar, HGMD, cosmic, 1000gemome, EAS, Pubmed等）

应用案例

癌症病人单个外周血循环肿瘤细胞的外显子测序
Ni X., Zhou M., Su Zhe, Duan J., et al. Reproducible copy number variation patterns among single circulating tumor cells of lung cancer patients.PNAS,Nov.5,2013

研究人员利用MALBAC扩增技 术，首次报道了对于癌症(cancer)病人单个外周血循环肿瘤细胞的全基因组、外显子组测序结果，此项研究对于揭示癌症(cancer)转移的分子机制(Molecular Mechanisms)具有重要意义，同时还为无创癌症(cancer) 诊断提供了一种新的技术手段。 MALBAC技术具有基因组扩增均匀，覆盖率高等众多优势，从而使得研 究人员可以在单个细胞水平准确探 测全基因组基因拷贝数变异(CNVs) 和单核苷酸变异(SNVs)。

循环肿瘤细胞（CTCs）单个细胞中的拷贝数变异（CNVs）