一文搞懂无缝克隆（视频干货版）

分子克隆是分子生物学中用于组装重组DNA分子并指导其在宿主体内复制的一套实验方法。将目的基因与载体DNA重组，然后引入到寄主细胞内进行复制与扩增，经筛选获得重组克隆DNA。传统的克隆包括酶切位点设计、引物设计、PCR、质粒抽提、双酶切与连接，克隆与转化等步骤。根据操作的熟练程度，成功构建一个质粒少说需要3天，如果遇到困难，甚至要长达数月才能成功得到一个装有目的基因的质粒。对于需要进行多个不连续的基因位点突变，或目的基因过长的分子克隆来说，往往需要将目的基因拆分成多个片段进行编辑与插入。多一个基因片段就意味着要多设计两段含酶切位点的引物，工作量倍增。而无缝克隆能在各个方面完胜传统克隆，让分子克隆变得更简单高效。

图1. 传统克隆与无缝克隆对比。

无缝克隆原理

目前流行的无缝克隆方法主要有Gibson Assembly法和In-Fusion Cloning法，无论是哪种方法都是基于“同源重组”来实现“无缝”克隆的。（点击视频详细了解无缝克隆原理）

实验流程

无缝克隆实验流程主要包括：载体线性化、目的片段制备、反应体系配制、孵育和转化及克隆鉴定。每一步该怎么做，需要注意什么问题，快点击视频了解~

分子量计算

在配制反应体系时该加多少线性化载体？加多少目的片段?是很多初学者最头疼的事情了。不怕不怕，快来跟着小编从原理到实践搞定它！

常见问题答疑

为什么有时候会转化效率低，菌落很少甚至没有？为什么阳性率过低？……点击视频了解原因~

文献实例

2022年9月21日，中科院深圳先进技术研究院马田副研究员、武汉大学刘天罡教授团队与邓子新院士合作，在 Nature Communications （IF:17.694）上发表了题为 Metabolic pathway assembly using docking domains from type I cis-AT polyketide synthases 的研究论文，该研究模拟了天然模块聚酮合酶的有序组装，开发了能够有效提高人工细胞工厂合成效率的mPKSeal策略。特别地，该研究使用碧云天无缝克隆试剂盒（D7010S）成功完成了目的质粒的构建。

2022年8月20日深圳湾实验室系统与物理生物学研究所李刚课题组在Nature Communications（IF:17.694）上发表了题为 Spatiotemporal-resolved protein networks profiling with photoactivation dependent proximity labeling 的研究论文, 该研究开发了一种基于单线态氧邻近标记、具有高时空分辨率的蛋白相互作用网络分析的蛋白质组学平台。特别地，该研究使用碧云天无缝克隆试剂盒（D7010S）成功将COX4基因中的线粒体基质靶向序列组装到制定载体中。

你学废了吗~~~快趁热打铁实践下吧~有什么疑问欢迎留言告诉小编~

产品信息：

产品编号	产品名称	产品
D7010FT	Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒, 试用装)	5次
D7010S	Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒)	20次
D7010M	Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒)	100次